奶牛乳腺成纤维细胞中TLR、NOD及其信号通路相关基因mRNA表达检测
发布时间：2023-05-06 01:46
Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)和核苷酸结合寡聚化结构域蛋白(Nucleotide-binding oligo merization domain protein, NOD)是存在于细胞膜上或细胞内的模式识别受体,能够识别病原微生物进而启动信号通路,使细胞释放炎症因子,参与先天性免疫反应。成纤维细胞通常是一种不活跃的细胞,在乳腺中主要起到支持乳腺组织结构和修复损伤的作用。但是近年来研究发现,炎症时成纤维细胞受到某些刺激变得活跃,活化的成纤维细胞持续释放炎症因子,使炎症由急性转为慢性。研究成纤维细胞免疫的分子作用机制对乳腺炎的防控可能具有重要意义。本研究检测奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD的表达情况,并对细胞中TLR和NOD信号通路进行研究,从而初步揭示乳腺成纤维细胞的在先天性免疫方面的作用,为深入研究奶牛乳腺成纤维细胞免疫学机制提供实验依据。1.奶牛乳腺成纤维细胞的分离培养培养原代奶牛乳腺成纤维细胞采用组织块法。根据成纤维细胞和上皮细胞对胰酶敏感度不同,差时消化法连续纯化成纤维细胞。每天定时观察细胞的形态和生长情况,用纯化的成纤维细胞测生长曲线。吉姆萨...
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述
1 Toll样受体概述
1.1 TLR的结构及分布
1.2 TLR功能
1.3 TLR信号通路
1.3.1 MyD88依赖型途径
1.3.2 MyD88非依赖型途径
2 NOD概述
2.1 NOD的结构及分布
2.2 NOD功能
2.3 NOD的信号通路
3 成纤维细胞的免疫相关作用
4 成纤维细胞中TLR和NOD表达及功能
5 研究的目的和意义
第二章 奶牛乳腺成纤维细胞的分离培养
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 材料
1.4 实验常用试剂配制
2 试验方法
2.1 奶牛乳腺组织采样处理
2.2 组织块法培养原代乳腺成纤维细胞
2.3 乳腺成纤维细胞的纯化
2.4 绘制奶牛乳腺成纤维细胞生长曲线图
2.5 奶牛乳腺成纤维细胞的冻存与复苏
2.6 奶牛乳腺成纤维细胞的形态鉴定
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺成纤维细胞的原代培养
3.2 奶牛乳腺成纤维细胞生长曲线图
3.3 奶牛乳腺成纤维细胞的冻存及复苏
3.4 吉姆萨染色对细胞的形态鉴定
4 讨论
第三章 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR mRNA表达及半定量分析
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 材料
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 脾脏组织及奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.3 cDNA第1链合成
2.4 PCR反应
2.5 基因半定量分析
2.6 统计学分析
3 结果与分析
3.1 脾脏中TLR1～TLR10基因RT-PCR
3.2 TLR1～TLR10在奶牛乳腺成纤维细胞中的表达
3.3 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR1-TLR10表达半定量分析
4 讨论
第四章 奶牛乳腺成纤维细胞中NOD表达及半定量分析
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 材料
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 脾脏组织及奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.3 cDNA第1链合成
2.4 PCR反应
2.5 基因半定量分析
2.6 统计学分析
3 结果与分析
3.1 脾脏中NOD1和NOD2基因RT-PCR
3.2 NOD1和NOD2在奶牛乳腺成纤维细胞中的表达
3.3 奶牛乳腺成纤维细胞中NOD基因表达半定量分析
4 讨论
第五章 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD信号通路相关基因及其下游炎症因子mRNA表达检测
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.3 cDNA第1链合成
2.4 PCR反应
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD信号通路相关基因的表达
3.2 奶牛乳腺成纤维细胞中炎症因子的表达
4 讨论
第六章 PAMP诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达影响
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 实验常用试剂配制
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 细胞处理
2.3 lipid A和MDP刺激细胞
2.4 奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.5 cDNA第1链合成
2.6 PCR反应
2.7 基因半定量分析
2.8 统计学分析
3 结果与分析
3.1 lipid A诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中TLR4、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达影响
3.2 MDP诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA影响
4 讨论
结论
参考文献
致谢
本文编号：3808774
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述
1 Toll样受体概述
1.1 TLR的结构及分布
1.2 TLR功能
1.3 TLR信号通路
1.3.1 MyD88依赖型途径
1.3.2 MyD88非依赖型途径
2 NOD概述
2.1 NOD的结构及分布
2.2 NOD功能
2.3 NOD的信号通路
3 成纤维细胞的免疫相关作用
4 成纤维细胞中TLR和NOD表达及功能
5 研究的目的和意义
第二章 奶牛乳腺成纤维细胞的分离培养
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 材料
1.4 实验常用试剂配制
2 试验方法
2.1 奶牛乳腺组织采样处理
2.2 组织块法培养原代乳腺成纤维细胞
2.3 乳腺成纤维细胞的纯化
2.4 绘制奶牛乳腺成纤维细胞生长曲线图
2.5 奶牛乳腺成纤维细胞的冻存与复苏
2.6 奶牛乳腺成纤维细胞的形态鉴定
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺成纤维细胞的原代培养
3.2 奶牛乳腺成纤维细胞生长曲线图
3.3 奶牛乳腺成纤维细胞的冻存及复苏
3.4 吉姆萨染色对细胞的形态鉴定
4 讨论
第三章 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR mRNA表达及半定量分析
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 材料
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 脾脏组织及奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.3 cDNA第1链合成
2.4 PCR反应
2.5 基因半定量分析
2.6 统计学分析
3 结果与分析
3.1 脾脏中TLR1～TLR10基因RT-PCR
3.2 TLR1～TLR10在奶牛乳腺成纤维细胞中的表达
3.3 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR1-TLR10表达半定量分析
4 讨论
第四章 奶牛乳腺成纤维细胞中NOD表达及半定量分析
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 材料
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 脾脏组织及奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.3 cDNA第1链合成
2.4 PCR反应
2.5 基因半定量分析
2.6 统计学分析
3 结果与分析
3.1 脾脏中NOD1和NOD2基因RT-PCR
3.2 NOD1和NOD2在奶牛乳腺成纤维细胞中的表达
3.3 奶牛乳腺成纤维细胞中NOD基因表达半定量分析
4 讨论
第五章 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD信号通路相关基因及其下游炎症因子mRNA表达检测
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.3 cDNA第1链合成
2.4 PCR反应
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺成纤维细胞中TLR和NOD信号通路相关基因的表达
3.2 奶牛乳腺成纤维细胞中炎症因子的表达
4 讨论
第六章 PAMP诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达影响
1 试验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 实验常用试剂配制
2 试验方法
2.1 引物设计及合成
2.2 细胞处理
2.3 lipid A和MDP刺激细胞
2.4 奶牛乳腺成纤维细胞总RNA的提取
2.5 cDNA第1链合成
2.6 PCR反应
2.7 基因半定量分析
2.8 统计学分析
3 结果与分析
3.1 lipid A诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中TLR4、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达影响
3.2 MDP诱导对奶牛乳腺成纤维细胞中NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA影响
4 讨论
结论
参考文献
致谢
本文编号：3808774
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3808774.html
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