miR-92a-1-5p靶向SOCS5抑制猫泛白细胞减少症病毒复制的机制

发布时间：2023-05-13 00:14

　　猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)可以引起一种具有高度传染性的猫泛白细胞减少症。目前,防控该病主要以疫苗接种为主。MicroRNAs(miRNAs)是长度约18～25个核苷酸的单链非编码RNA,大量研究表明miRNAs参与多种细胞生命活动并在宿主的抗病毒感染过程中扮演重要的角色。但关于宿主miRNAs对FPV复制的影响及两者相互作用的具体机制目前尚无报道。为探索miRNAs参与FPV感染过程的相关机制,利用高通量测序技术检测了FPV感染F81细胞前后,细胞miRNAs表达谱的变化情况。得到了细胞接种FPV前后的两个小RNA数据库。对数据初步分析,鉴定出792个已知miRNAs成熟体和271个新的miRNAs成熟体,其中包括57个表达差异显著的miRNAs。利用荧光定量PCR对随机筛选的15个miRNAs表达水平进行鉴定,结果显示,14个miRNAs的差异水平与高通量测序结果一致。分析测序结果并结合相关文献,筛选合成9个miRNAs模拟物。F81细胞转染miRNAs模拟物或对照后接种FPV,绝对荧光定量和western blot实验分析筛...

【文章页数】：123 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 国内外研究进展
    1.2 猫泛白细胞减少症概述
    1.3 细小病毒科概述
        1.3.1 猫泛白细胞减少症病毒特性
        1.3.2 猫泛白细胞减少症病毒复制机制
        1.3.3 细小病毒编码蛋白及功能概述
        1.3.4 猫泛白细胞减少症病毒致病机理
    1.4 抗病毒先天性免疫
        1.4.1 I型干扰素概述
        1.4.2 细胞因子信号转导抑制因子概述
    1.5 micro RNAs研究概述
        1.5.1 micro RNAs简介
        1.5.2 micro RNAs参与抗病毒免疫应答
        1.5.3 micro RNAs与细小病毒
        1.5.4 micro RNAs与转录因子调控
    1.6 目的与意义
第二章 FPV感染F81 细胞的miRNAs组学分析及筛选
    2.1 材料与方法
        2.1.1 病毒株和细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 测序样品的制备
        2.1.4 样品总RNA的提取
        2.1.5 高通量测序
        2.1.6 测序数据的分析处理
        2.1.7 miRNAs表达量的验证
        2.1.8 筛选目标miRNAs
    2.2 结果
        2.2.1 测序数据分析
        2.2.2 miRNAs的鉴定和差异表达分析
        2.2.3 茎环qRT-PCR验证miRNAs的表达
        2.2.4 miR-92a-1-5p的筛选
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 转录因子SP1 上调miR-92a-1-5p转录水平的初步研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 病毒株和细胞
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 细胞内源性miR-92a-1-5p表达量的检测
        3.1.4 miR-92a-1-5p上游基因核心序列的鉴定
        3.1.5 双荧光素酶检测FPV对 miR-92a-1-5p上游基因序列的影响
        3.1.6 鉴定结合miR-92a-1-5p上游核心基因序列的转录因子
        3.1.7 FPV对细胞内源性SP1表达的影响
    3.2 结果
        3.2.1 FPV影响miR-92a-1-5p的表达
        3.2.2 miR-92a-1-5p上游基因核心序列
        3.2.3 FPV影响miR-92a-1-5p上游基因序列的酶活性
        3.2.4 SP1 促进miR-92a-1-5p的表达
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 miR-92a-1-5p对 FPV复制的影响及机制
    4.1 材料与方法
        4.1.1 病毒株和细胞
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 qRT-PCR检测miR-92a-1-5p对 FPV mRNA的影响
        4.1.4 Western Blot检测miR-92a-1-5p对 FPV蛋白表达的影响
        4.1.5 IFA检测miR-92a-1-5p对 FPV复制的影响
        4.1.6 TCID50 实验检测miR-92a-1-5p对 FPV复制的影响
        4.1.7 FPV-BJ04 毒株对I型干扰素的影响
        4.1.8 miR-92a-1-5p对 I型干扰素的影响
        4.1.9 miR-92a-1-5p对 NF-κB通路的影响
        4.1.10 miR-92a-1-5p靶基因的筛选及验证
        4.1.11 数据统计学分析
    4.2 结果
        4.2.1 miR-92a-1-5p抑制FPV mRNA表达
        4.2.2 miR-92a-1-5p抑制FPV蛋白表达
        4.2.3 miR-92a-1-5p抑制FPV复制
        4.2.4 FPV-BJ04 毒株对I型干扰素的影响
        4.2.5 miR-92a-1-5p促进I型干扰素的表达
        4.2.6 miR-92a-1-5p经 NF-κB通路调控I型干扰素的表达
    4.3 讨论
    4.4 小结
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历



本文编号：3814917