种公猪精液传播的主要病毒性疫病监测及mPCR方法的建立

发布时间：2023-05-20 00:59

　　随着集约化规模化养猪业的快速发展,许多国家越来越广泛运用猪的人工授精技术(AI)进行配种繁殖。种公猪在养猪业生产中的地位十分重要,关系到母猪的受孕、妊娠与分娩以及仔猪的健康,而精液是否携带病毒则关系到猪场相关疫病的传播与否;虽然用于人工授精的精液里出现的病毒不一定导致母猪感染疫病,但精液仍然是传播病毒性疫病的一大风险。国内外许多研究表明种公猪精液是导致病毒性疫病传播的媒介,这些病毒既有DNA病毒又有RNA病毒,其中猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪日本乙脑炎病毒(JEV)、猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细小病毒(PPV)是种公猪精液中最为常见的导致母猪繁殖障碍性的病原,种公猪精液如果携带这些病毒会导致猪繁殖障碍类等疫病的发生,引起妊娠母猪流产、产死胎或木乃伊胎或新生仔猪带毒,给养猪业健康生产造成了巨大的损失。由于这些猪病毒通常会引起非常相似的临床症状,且常伴随着混合感染,对混合感染的病原体进行单独检测往往比较费时,为实现在种猪精液多病原混合感染的快速诊断,本研究建立了针对CSFV、PRRSV、FMDV、...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 种公猪传播病毒性疫病的研究进展
        1.1 种公猪精液传播的常见病毒性疫病
        1.2 种公猪精液传播的其他病毒
    2 猪病毒性疫病单一PCR和多重PCR方法研究进展
        2.1 单一PCR/RT-PCR方法
        2.2 二重PCR/RT-PCR方法
        2.3 三重PCR/RT-PCR方法
        2.4 四重PCR/RT-PCR方法
        2.5 五重PCR/RT-PCR方法
        2.6 六重PCR/RT-PCR方法
    3 研究目的及意义
第二章 种公猪精液传播的CSFV、PRRSV、JEV、FMDV、PRV、PCV-2和PPV的检测及其单一PCR/RT-PCR方法的建立
    1 材料
        1.1 病毒、病料
        1.2 主要试剂
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 主要实验仪器
        1.5 引物设计与合成
    2 方法
        2.1 病料处理
        2.2 核酸提取
        2.3 病毒核酸的PCR/RT-PCR扩增
        2.4 CSFV、PRRSV、JEV、FMDV、PRV、PCV-2和PPV目的基因的鉴定
        2.5 单一PCR/RT-PCR诊断方法的建立
        2.6 单一PCR/RT-PCR诊断方法对临床样本的检测
    3 结果
        3.1 CSFV、PRRSV、JEV、FMDV、PRV、PCV-2和PPV目的基因的鉴定
        3.2 单一PCR/RT-PCR诊断方法的建立
        3.3 单一PCR/RT-PCR诊断方法对临床样本的检测
    4 讨论
    5 结论
第三章 种公猪精液传播七种常见病毒多重PCR方法的建立与初步应用研究
    1 材料
        1.1 病毒、细胞及病毒基因质粒
        1.2 病料
        1.3 主要试剂
        1.4 主要溶液的配制
        1.5 主要实验仪器
    2 方法
        2.1 病毒核酸提取
        2.2 引物设计与合成
        2.3 七重PCR诊断方法的建立
        2.4 七重PCR诊断方法对种公猪精液临床病料的检测
    3 结果
        3.1 种公猪精液携带七种病毒七重PCR诊断方法的建立
        3.2 七重PCR诊断方法对种公猪精液临床病料的检测
    4 鉴别种公猪精液常见病毒七重PCR试剂盒的组装
        4.1 对照的制备
        4.2 mPCR Mix的制备
        4.3 试剂盒的成分及组装
        4.4 试剂盒操作说明
    5 讨论
    6 结论
主要参考文献
致谢
附录一 攻读硕士学位期间参与发表的学术论文
附录二 本文用到的部分英文缩写及含义说明



本文编号：3820230