成肌细胞中T1R1/T1R3介导调控mTOR信号的氨基酸筛选及分子机制
发布时间：2023-05-22 01:36
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin,m TOR)能够调节细胞的生长。m TOR能够组成两种功能复合物:m TORC1和m TORC2,其中m TORC1能够通过其上游多种“感受器”感受细胞内外的一系列信号变化,包括能量状态、生长因子和激素、营养因子等,来调节细胞内蛋白质合成和降解,从而调控细胞生长。营养因子中,氨基酸既是蛋白质合成的必需底物,也是m TORC1活性调节的必要的信号分子。在氨基酸中,亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸被认为能有效调节m TORC1活性。且氨基酸转运感受体参与氨基酸依赖性的m TOR活性调节过程。近几年研究发现一种G蛋白偶联受体T1R1/T1R3(Taste Receptor Type 1subtype1/3,T1R1/T1R3)能够作为广谱性的氨基酸感受体感应胞外氨基酸,通过促进胞内Ca2+增加激活ERK1/2来参与调控m TOR。然而目前研究主要针对胞外总的氨基酸,究竟哪些氨基酸参与该过程并不清楚,因此T1R1/T1R3介导调控m TOR信号是否具有氨基酸特异性及其调控机制有待进一步阐明。本课题研究内容由两部分组成,...
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1 前言
2. mTOR信号调控蛋白质沉积
2.1 mTORC1 定义及组成
2.2 mTORC1 和蛋白质合成
2.3 mTORC1 与自噬和蛋白质降解
3 氨基酸对mTOR信号的调节
3.1 调节mTOR信号的氨基酸
3.2 氨基酸调节mTOR信号的机制
3.3 不同种类氨基酸调节mTOR信号的区别
4 mTOR信号调节中的氨基酸转运感应机制
4.1 参与mTOR信号调节的氨基酸转运体
4.2 参与mTOR信号调节的氨基酸转运感受体
4.3 参与mTOR信号调节的氨基酸受体
5 氨基酸受体T1R1/T1R3 在mTOR信号调节中的作用及机制
5.1 T1R1/T1R3 定义及作用方式
5.2 T1R1/T1R3 对氨基酸的感应情况
5.3 T1R1/T1R3 感应氨基酸的种属特异性
5.4 T1R1/T1R3 发挥不同功能时的氨基酸特异性
5.5 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号的分子机制
5.6 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号的特异性
6 问题的提出及研究的目的与意义
第二章 参与T1R1/T1R3 介导的调控mTOR信号的胞外氨基酸筛选
1 前言
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.2 主要仪器、试剂和溶液的配制
2.2.1 主要仪器
2.2.2 主要试剂和试剂盒
2.2.3 主要溶液的配制
2.3 实验方法
2.3.1 C2C12 细胞培养及诱导分化
2.3.2 细胞药物处理
2.3.3 总RNA提取及反转录
2.3.4 Q-PCR
2.3.5 细胞总蛋白抽提及Western blot检测
2.3.6 SUnSET非放射性方法测蛋白质合成速率
2.3.7 Fluo-8 检测胞内Ca2+变化
2.3.8 统计分析
3 结果与分析
3.1 Q-PCR鉴定C2C12 成肌细胞中T1R1/T1R3 的表达情况
3.2 C2C12 细胞中T1R1/T1R3 感应氨基酸的功能验证
3.2.1 [Ca2+] i抑制剂BAPTA-AM处理对mTORC1 的影响
3.2.2 ERK1/2 抑制剂U0126 处理对mTORC1 的影响
3.2.3 T1R1/T1R3 感应氨基酸增强剂处理对mTORC1 的影响
3.3 影响T1R1/T1R3、mTOR信号的氨基酸筛选
3.3.1 Western blot验证能影响细胞内Ca2+浓度的氨基酸mTORC1 的影响
3.3.2 SUnSET非放射性方法检测蛋氨酸对蛋白质合成的影响
3.3.3 Rapamycin处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.3.4 Q-PCR检测蛋氨酸对蛋白质降解相关基因Atrogin1 及MuRF1 水平的影响
4 讨论
4.1 T1R1/T1R3 在C2C12 细胞中的表达及功能验证
4.2 影响 T1R1/T1R3、m TOR 信号的氨基酸筛选
第三章 C2C12 成肌细胞内氨基酸调控mTORC1 的机制及特异性研究
1 前言
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.2 试验方法
3 结果与分析
3.1 蛋氨酸调控 m TORC1 的机制
3.1.1 IMP处理对蛋氨酸引起的蛋白质合成相关蛋白水平的影响
3.1.2 U73122 处理对蛋氨酸引起的蛋白质合成的影响
3.1.3 蛋氨酸对细胞内 Ca2+的影响
3.1.4 BAPTA-AM处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.1.5 U0126 处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.2 ERK1/2 在T1R1/T1R3 介导蛋氨酸调控mTOR中的作用
3.3 T1R1/T1R3 介导调控mTOR信号的氨基酸特异性研究
3.3.1 不同氨基酸处理对p-ERK、p-mTOR蛋白水平的影响
3.3.2 BAPTA-AM、U0126 处理对亮氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.3.3 蛋氨酸、亮氨酸处理对蛋白质合成相关蛋白水平的影响比较
3.3.4 蛋氨酸调控mTOR的种属特异性
4 讨论
4.1 蛋氨酸能通过T1R1/T1R3-PLC-Ca2+-ERK1/2 信号转导途径激活mTORC1。
4.2 ERK1/2 在 T1R1/T1R3 介导蛋氨酸调控 m TOR 中的作用。
4.3 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号具有氨基酸特异性。
4.4 小结
结语
1 研究结论
2 创新点
3 本研究不足之处
参考文献
致谢
本文编号：3821744
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1 前言
2. mTOR信号调控蛋白质沉积
2.1 mTORC1 定义及组成
2.2 mTORC1 和蛋白质合成
2.3 mTORC1 与自噬和蛋白质降解
3 氨基酸对mTOR信号的调节
3.1 调节mTOR信号的氨基酸
3.2 氨基酸调节mTOR信号的机制
3.3 不同种类氨基酸调节mTOR信号的区别
4 mTOR信号调节中的氨基酸转运感应机制
4.1 参与mTOR信号调节的氨基酸转运体
4.2 参与mTOR信号调节的氨基酸转运感受体
4.3 参与mTOR信号调节的氨基酸受体
5 氨基酸受体T1R1/T1R3 在mTOR信号调节中的作用及机制
5.1 T1R1/T1R3 定义及作用方式
5.2 T1R1/T1R3 对氨基酸的感应情况
5.3 T1R1/T1R3 感应氨基酸的种属特异性
5.4 T1R1/T1R3 发挥不同功能时的氨基酸特异性
5.5 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号的分子机制
5.6 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号的特异性
6 问题的提出及研究的目的与意义
第二章 参与T1R1/T1R3 介导的调控mTOR信号的胞外氨基酸筛选
1 前言
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.2 主要仪器、试剂和溶液的配制
2.2.1 主要仪器
2.2.2 主要试剂和试剂盒
2.2.3 主要溶液的配制
2.3 实验方法
2.3.1 C2C12 细胞培养及诱导分化
2.3.2 细胞药物处理
2.3.3 总RNA提取及反转录
2.3.4 Q-PCR
2.3.5 细胞总蛋白抽提及Western blot检测
2.3.6 SUnSET非放射性方法测蛋白质合成速率
2.3.7 Fluo-8 检测胞内Ca2+变化
2.3.8 统计分析
3 结果与分析
3.1 Q-PCR鉴定C2C12 成肌细胞中T1R1/T1R3 的表达情况
3.2 C2C12 细胞中T1R1/T1R3 感应氨基酸的功能验证
3.2.1 [Ca2+] i抑制剂BAPTA-AM处理对mTORC1 的影响
3.2.2 ERK1/2 抑制剂U0126 处理对mTORC1 的影响
3.2.3 T1R1/T1R3 感应氨基酸增强剂处理对mTORC1 的影响
3.3 影响T1R1/T1R3、mTOR信号的氨基酸筛选
3.3.1 Western blot验证能影响细胞内Ca2+浓度的氨基酸mTORC1 的影响
3.3.2 SUnSET非放射性方法检测蛋氨酸对蛋白质合成的影响
3.3.3 Rapamycin处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.3.4 Q-PCR检测蛋氨酸对蛋白质降解相关基因Atrogin1 及MuRF1 水平的影响
4 讨论
4.1 T1R1/T1R3 在C2C12 细胞中的表达及功能验证
4.2 影响 T1R1/T1R3、m TOR 信号的氨基酸筛选
第三章 C2C12 成肌细胞内氨基酸调控mTORC1 的机制及特异性研究
1 前言
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.2 试验方法
3 结果与分析
3.1 蛋氨酸调控 m TORC1 的机制
3.1.1 IMP处理对蛋氨酸引起的蛋白质合成相关蛋白水平的影响
3.1.2 U73122 处理对蛋氨酸引起的蛋白质合成的影响
3.1.3 蛋氨酸对细胞内 Ca2+的影响
3.1.4 BAPTA-AM处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.1.5 U0126 处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.2 ERK1/2 在T1R1/T1R3 介导蛋氨酸调控mTOR中的作用
3.3 T1R1/T1R3 介导调控mTOR信号的氨基酸特异性研究
3.3.1 不同氨基酸处理对p-ERK、p-mTOR蛋白水平的影响
3.3.2 BAPTA-AM、U0126 处理对亮氨酸诱导的蛋白质合成的影响
3.3.3 蛋氨酸、亮氨酸处理对蛋白质合成相关蛋白水平的影响比较
3.3.4 蛋氨酸调控mTOR的种属特异性
4 讨论
4.1 蛋氨酸能通过T1R1/T1R3-PLC-Ca2+-ERK1/2 信号转导途径激活mTORC1。
4.2 ERK1/2 在 T1R1/T1R3 介导蛋氨酸调控 m TOR 中的作用。
4.3 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号具有氨基酸特异性。
4.4 小结
结语
1 研究结论
2 创新点
3 本研究不足之处
参考文献
致谢
本文编号：3821744
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3821744.html
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