鹿茸分裂层细胞的分离培养及褪黑激素对间充质细胞的影响

发布时间：2023-05-24 22:30

　　梅花鹿产茸量是茸鹿育种工作中的一项重要指标,决定着茸鹿的经济效应。褪黑激素(MLT)是一种光信号激素,能从多方面影响鹿茸生长,提高鹿茸的年产量。褪黑激素需要与其相应的受体结合才能发挥其生物学效应,因此对褪黑激素及其受体(MTNR)进行研究,具有重要的经济效益和生物育种效益。本研究选择的是在体外离体条件下,分别分离培养梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质细胞,并且通过添加不同浓度水平的褪黑激素作用鹿茸间充质细胞,来探究在体外培养条件下不同浓度褪黑激素对鹿茸间充质细胞的影响以及褪黑激素发挥效应的信号通路。 本研究所取样本来自湖北荆门五三梅花鹿(双阳品种)鹿场。本研究应用细胞培养、逆转录-PCR、Western blot技术、共聚焦显微定位、流式细胞技术、MTT法等技术,通过比较几种不同浓度褪黑激素对鹿茸间充质细胞生长和增殖的作用以及其受体在细胞中的表达量,旨在：(1)筛选促进鹿茸间充质细胞增殖效果最佳的褪黑激素浓度,为提高鹿茸产量提供依据；(2)探讨褪黑激素及其受体作用的信号通路,为进一步提高鹿茸产量奠定基础。主要研究内容和结果如下： 1.采用逆转录-PCR技术和Western blot技术检测了褪...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
    1.1 梅花鹿简介
    1.2 梅花鹿鹿茸的介绍
    1.3 影响鹿茸生长的因素
        1.3.1 品种
        1.3.2 年龄
        1.3.3 营养
        1.3.4 光照
        1.3.5 温度
        1.3.6 湿度
    1.4 褪黑激素的介绍
        1.4.1 MLT的理化性质
        1.4.2 MLT的合成
        1.4.3 MLT的代谢
    1.5 褪黑激素的生物学作用
        1.5.1 MLT分泌的节律性
        1.5.2 MLT对时差与睡眠的影响
        1.5.3 MLT对免疫功能的影响
        1.5.4 MLT的抗肿瘤作用
        1.5.5 MLT对繁殖系统的调节
        1.5.6 MLT抗氧化、衰老的作用
    1.6 褪黑激素受体的研究进展
        1.6.1 结构
        1.6.2 分类
        1.6.3 分布
    1.7 作用机制
2 研究的目的与意义
3 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 样本的采集
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要溶液
        3.1.4 主要仪器设备
    3.2 试验分组
    3.3 试验方法
        3.3.1 鹿茸增生层细胞的制备与培养
        3.3.2 鹿茸细胞的鉴定
        3.3.3 鹿茸细胞的细胞传代,细胞冻存与复苏
        3.3.4 褪黑激素受体在鹿茸间充质细胞中的鉴定
        3.3.5 褪黑激素对鹿茸细充质细胞的影响
        3.3.6 酶联免疫反应检测
    3.4 统计分析
4 结果与分析
    4.1 鹿茸增生层细胞的培养和鉴定
        4.1.1 增生层细胞的培养
        4.1.2 增生层细胞的鉴定
    4.2 间充质细胞总RNA提取物的质量
    4.3 目的基因MT1在转录水平上的表达
    4.4 MT1蛋白在鹿茸间充质细胞中的表达与分布
        4.4.1 Western blot技术检测MT1受体蛋白
        4.4.2 MTl蛋白的亚细胞定位
    4.5 细胞增殖的检测
    4.6 细胞周期的检测
    4.7 MLT对鹿茸间充质细胞激素分泌功能的影响
5 讨论
6 小结
    6.1 主要研究结果
    6.2 创新之处
参考文献
致谢



本文编号：3822405