奶牛乳房炎病原菌多重PCR检测方法的建立

发布时间：2023-05-28 12:36

　　为了同时检测奶牛乳房炎多种病原菌,试验采用金黄色葡萄球菌(S.aureus)nuc基因、牛支原体(M.bovis)oppD/F基因、大肠杆菌(E.coli)16S-23S rRNA基因内转录间隔区作为靶标设计3对特异性引物,在优化单菌退火温度的基础上确定多重PCR的退火温度,建立S.aureus、M.bovis和E.coli的多重PCR检测方法,验证多重PCR的重复性、特异性、敏感性及实用性。结果表明:基于单一PCR三者共同的最佳退火温度(55.3℃、56.5℃、57.8℃)优化多重PCR退火温度,最终确定57.8℃为三者最佳的退火温度。该方法能扩增出长度为237 bp(S.aureus)、333 bp(M.bovis)、634 bp(E.coli)的基因片段;靶标菌特异性扩增而非靶标菌无扩增条带,最低检测浓度分别为S.aureus 1 pg/μL、M.bovis 1 pg/μL、E.coli 100 fg/μL;正常乳样和临床乳房炎乳样均检出S.aureus(25.9%、53.8%)、M.bovis(10.3%、17.9%)和E.coli(32.8%、71.8%),但乳房炎乳样的阳性...

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【文章目录】：
1 材料
    1.1 菌株及乳样
    1.2 主要试剂
2 方法
    2.1 病原菌单一PCR条件的优化及重复性检测
    2.2 PCR产物的鉴定
    2.3 病原菌多重PCR方法的优化及建立
    2.4 多重PCR方法的特异性检测
    2.5 多重PCR方法敏感性的检测
    2.6 多重PCR方法实用性的检测
3 结果与分析
    3.1 金黄色葡萄球菌、牛支原体、大肠杆菌单一PCR扩增条件的优化、扩增产物的鉴定及方法的重复性
    3.2 多重PCR方法的优化及建立
    3.3 多重PCR 方法的特异性
    3.4 多重PCR 方法的敏感性
    3.5 多重PCR 方法的实用性
4 讨论
    4.1 本研究所建立的多重PCR方法的特异性、敏感性、实用性
    4.2 正常乳样中存在病原菌的原因分析



本文编号：3824602