EHEC O157:H7紧密素单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

发布时间：2023-06-03 11:36

　　肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic Escherichia coli, EHEC)0157:H7是一种重要的人兽共患病原菌,通过食源、水源等途径感染人类,导致严重的腹泻、出血性肠炎(Hemorrhagic Colitis,HC),溶血性尿毒症综合征(Hemolytic Uremic Syndrome,HUS)甚至血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic Thrombocytopenic Purpura,TTP)动物源性是EHEC O157:H7的重要特征。反刍动物(主要为牛)是EHEC0157：H7主要储存宿主,其次猪、羊、马、狗、鹅、兔、鸡、鱼及鹿等均有病原菌感染和分离的报道。感染动物主要通过排泄物污染食物、水源和环境,进而导致人类感染。人感染后,抗生素治疗会促进志贺毒素的快速释放,加速病情恶化,引起严重后果。因此,期待人类获得免疫力,而抵抗EHEC O157:H7的感染,目前不切实际。研制特异、快速而便捷的批量检测技术,显得至关重要。紧密素intimin)是EHEC(Enterohaemorrhagic E.coli)、EPEC (Enteroparhoge...

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摘要
ABSTRACT
英文缩略表(Abbreviation)
第一篇 文献综述
    1. EHEC O157：H7的主要毒力因子
        1.1 紧密素
        1.2 志贺毒素
        1.3 溶血素和致病性质粒编码的其他毒力基因
        1.4 脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）
    2 O157：H7的流行病学
        2.1 流行病学特点
        2.2 流行情况
    3 临床特征
    4 致病机制
        4.1 A/E损伤
        4.2 产生志贺毒素和溶血素
        4.3 炎症
    5 EHEC O157：H7检测方法
        5.1 常规性检测方法
        5.2 血清学检测方法
        5.3 免疫学检测
        5.4 分子生物学检测方法
    6 防控策略
    参考文献
第二篇 试验研究
    第一章 EHEC O157：H7紧密素(intimin)单克隆抗体的制备与鉴定
        1 材料
            1.1 菌株
            1.2 试验动物及细胞
            1.3 试验主要试剂和仪器
        2 方法
            2.1 抗原的制备
            2.2 免疫动物
            2.3 细胞融合
            2.4 间接ELISA最佳抗原包被浓度和血清稀释倍数的确定
            2.5 阳性杂交瘤细胞株的筛选
            2.6 阳性杂交瘤细胞的克隆化
            2.7 阳性杂交瘤细胞的冻存和复苏
            2.8 MAb腹水的制备
            2.9 间接ELISA方法检测单克隆抗体特异性及单抗对EHEC O157：H7的初步检测
            2.10 单克隆抗体活性鉴定
            2.11 杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性鉴定
            2.12 腹水敏感性测定
        3 结果
            3.1 Intimin重组蛋白的表达、纯化
            3.2 细胞融合率、阳性率与细胞克隆
            3.3 间接ELISA方法的建立
            3.4 间接ELISA方法检测单克隆抗体特异性及单抗对EHEC O157：H7的初步检测
            3.5 单抗对intimin最小检出限的初步测定
            3.6 Western-blot检测
        4 讨论
        参考文献
    第二章 EHEC O157双抗体夹心ELISA检测方法的建立
        1 材料
            1.1 菌株与实验动物
            1.2 抗体
            1.3 主要试剂及仪器
        2 方法
            2.1 兔抗EHEC O157：H7高免血清制备
            2.2 兔抗EHEC O157：H7高免血清的纯化
            2.3 提纯腹水、多抗效价和浓度测定
            2.4 双抗体夹心ELISA方法最适反应条件的确定
            2.5 特异性试验
            2.6 敏感性试验
            2.7 重复性试验
            2.8 阴阳临界值的确定
        3 结果
            3.1 兔抗高免血清效价、纯度及浓度测定
            3.2 双夹心ELISA方法最适反应条件的确定
            3.3 特异性试验
            3.4 敏感性试验
            3.5 重复性试验
            3.6 阴阳临界值的确定
        4 讨论
        参考文献
全文总结
附录：常用试剂的配制
硕士期间发表文章
致谢



本文编号：3829258