敲低鸡FOXL2对颗粒细胞基因表达的影响

发布时间：2023-10-06 17:41

　　母鸡的产蛋性能是家禽生产中的一个重要指标,与母鸡卵巢的发育密切相关。卵巢发育是一个动态的、受多种因子调控的复杂过程,但其中具体的因素及其作用机制仍不清楚。在哺乳动物中FOXL2(Forkhead box L2,叉头蛋白L2)一直被认为是控制雌性正常生殖生理的关键因子,同时也被认为是卵巢发育过程中重要的基因,若其发生突变将会造成卵巢早衰等不孕症甚至癌症。本研究以FOXL2为研究对象,通过分别在鸡卵巢poGC(Pre-ovulatory follicle granulosa cells,排卵前卵泡颗粒细胞或称等级卵泡颗粒细胞)和phGC(Pre-hierarchical follicle granulosa cells,等级前卵泡颗粒细胞或称小黄卵泡颗粒细胞)中敲低FOXL2基因的表达,结合转录组测序获取转录基因的变化情况,研究FOXL2在鸡卵泡选择与卵泡发育过程中参与的生物学过程与调控作用。主要的研究结果如下:1.设计并合成三条特异性靶向FOXL2基因的siRNA,利用脂质体在原代培养的鸡卵巢排卵前卵泡颗粒细胞中分别转染不同的siRNA或NC-siRNA,24h后检测FOXL2基因在mR...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
    1.1 研究问题的由来
    1.2 文献综述
        1.2.1 鸡的卵泡发育
        1.2.2 颗粒细胞在卵巢卵泡选择与发育中的作用
        1.2.3 FOXL2 及其编码基因
        1.2.4 FOXL2 基因的表达与分布特点
        1.2.5 FOXL2 的功能
        1.2.6 RNAi技术及其在基因功能研究中的应用
        1.2.7 转录组测序技术
    1.3 目的与意义
    1.4 研究技术路线
2 试验材料与方法
    2.1 试验材料
    2.2 主要仪器、试剂和溶液配制
        2.2.1 主要仪器与设备
        2.2.2 主要试剂和试剂盒
        2.2.3 溶液配制
    2.3 试验方法
        2.3.1 鸡颗粒细胞的分离与原代培养
        2.3.2 在鸡颗粒细胞中敲低FOXL2 表达
        2.3.3 细胞总RNA的提取和qPCR
        2.3.4 总蛋白提取及Western Blot验证
        2.3.5 转录组测序及差异表达基因分析
        2.3.6 细胞增殖、DNA复制、凋亡及细胞周期检测
    2.4 生物信息学分析相关软件和数据库
        2.4.1 生物统计学分析
        2.4.2 生物信息学分析相关软件
        2.4.3 数据库
3 结果与分析
    3.1 在鸡颗粒细胞中敲低FOXL2 表达
        3.1.1 鸡颗粒细胞总RNA提取
        3.1.2 cDNA质量检测
        3.1.3 转染不同siRNA对 FOXL2 基因表达量的影响
        3.1.4 转染不同时间FOXL2 蛋白的相对表达量
    3.2 转录组测序及分析
        3.2.1 测序样本的敲低效果及总RNA质量检测
        3.2.2 转录组测序数据评估
        3.2.3 DEGs筛选
        3.2.4 部分DEGs验证
        3.2.5 DEGs功能分析
    3.3 FOXL2 对鸡颗粒细胞细胞行为的影响
        3.3.1 细胞增殖
        3.3.2 细胞DNA复制
        3.3.3 细胞凋亡
        3.3.4 细胞周期
4 讨论
    4.1 FOXL2 在鸡颗粒细胞中的作用与调控的基因
    4.2 FOXL2 对颗粒细胞的细胞增殖等行为的影响
    4.3 转染实验
5 小结
    5.1 本研究得到的结果
    5.2 本研究中的创新点
    5.3 本研究的不足之处
    5.4 本研究的下一步计划
参考文献
致谢



本文编号：3852164