伊氏锥虫TatD-like DNase功能研究

发布时间：2023-10-26 18:28

　　伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)是一种常见的通过虫媒传播的寄生原虫,是家畜伊氏锥虫病(或苏拉病)的病原。该寄生虫主要寄生于马、骡、骆驼、牛等多种动物的血液当中,能引起动物的消瘦、贫血、神经症状,严重的会引起动物死亡,给畜牧养殖业带来巨大的经济损失。此外,也有伊氏锥虫感染人的报道,表明伊氏锥虫是一种潜在的人兽共患病病原。伊氏锥虫有比较完备的免疫逃避机制,最典型的是通过不断的改变体表的主要毒力因子变异表面糖蛋白(variable surface glucoprotein,VSG)从而逃避宿主的特异性免疫。也正因为这种免疫逃避机制的存在,导致现有的针对伊氏锥虫病的特异性疫苗效果欠佳,亟待我们发现一种新的途径防治伊氏锥虫病。近几年在细菌学研究方面发现,很多病原菌通过分泌DNA酶降解宿主免疫细胞(如巨噬细胞、嗜中性粒细胞等)释放出来的DNA外捕网达到在宿主体内扩散的目的。本课题组以往研究发现,寄生虫感染的宿主能产生细胞外捕网(Extracellular Traps,ETs)捕获侵染的寄生虫,而寄生虫通过分泌脱氧核糖核酸水解酶(deoxyribonuclease,DNase)起到水...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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英文缩略表
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1.1 伊氏锥虫病概述
        1.1.1 伊氏锥虫病原学
        1.1.2 流行病学
        1.1.3 致病机制
        1.1.4 临床症状及病理变化
        1.1.5 诊断治疗
    1.2 伊氏锥虫免疫逃避机制
        1.2.1 针对特异性免疫的逃避机制
        1.2.2 针对非特异性免疫的逃避机制
    1.3 TatD脱氧核糖核酸酶
    1.4 研究的目的与意义
第二章 TatD-like DNase蛋白质的生物信息学分析
    2.1 方法
        2.1.1 目的基因的序列分析
        2.1.2 目的基因的分子进化分析
        2.1.3 目的蛋白质的结构预测
    2.2 结果与分析
        2.2.1 TatD-like DNase蛋白质的结构
        2.2.2 锥虫属及其它病原DNase蛋白质进化关系分析
        2.2.3 不同物种TatD-like DNase氨基酸序列比较
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 伊氏锥虫TatD-like DNase基因的原核表达、重组蛋白质的纯化及多克隆抗体的制备
    3.1 材料
        3.1.1 虫株、质粒及实验动物
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 主要溶液的配制
    3.2 方法
        3.2.1 伊氏锥虫纯化及cDNA的制备
        3.2.2 原核表达载体的构建
        3.2.3 TatD-like DNase重组蛋白质的表达及纯化
        3.2.4 动物免疫
        3.2.5 特异性抗体检测
        3.2.6 多克隆抗体纯化及特异性检测
    3.3 结果与分析
        3.3.1 虫体总RNA的鉴定结果
        3.3.2 TatD-like DNase基因重组质粒的鉴定结果
        3.3.3 TatD-like DNase重组蛋白质纯化及检测结果
        3.3.4 免疫血清及特异性IgG的纯化结果
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 Tat D-like DNase蛋白质在伊氏锥虫的表达及定位
    4.1 材料
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 主要溶液的配制
    4.2 方法
        4.2.1 TatD-like DNase基因转录水平分析
        4.2.2 全虫蛋白质中TatD-like DNase的Westernblot鉴定
        4.2.3 TatD-like DNase蛋白质在虫体的表达定位
    4.3 结果与分析
        4.3.1 TatD-like DNase基因转录水平结果
        4.3.2 TatD-like DNase蛋白质的表达及定位
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 TatD-like DNase蛋白质的生物化学特性及功能分析
    5.1 材料
        5.1.1 主要试剂
        5.1.2 主要仪器
    5.2 方法
        5.2.1 小鼠DNA的提取
        5.2.2 Tat D-like DNase蛋白质的体外功能实验
    5.3 结果与分析
        5.3.1 小鼠DNA纯化结果
        5.3.2 重组TatD-like DNase蛋白质的生物化学特性及功能分析
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间文章发表情况



本文编号：3856720