关中奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立和性别鉴定

发布时间：2023-10-22 13:01

　　本论文在对奶山羊同期发情研究的基础上，拟建立奶山羊胎儿成纤维细胞系，并对细胞系进行生物学特性分析和性别鉴定，以期为奶山羊乳腺生物反应器的建立提供基础生物材料。 （1）分别采用3种方法处理母羊，试验证明用CIDR结合PG和FSH能取得最高同期发情率。在发情同期化程度上用CIDR结合PG及FSH的方法和CIDR结合PG及PMSG的方法用于发情同期化均有较好结果。采用自然配种，妊娠率Ⅰ组最高。 （2）手术获取40至45日龄奶山羊胎儿，采用组织块培养法和胰蛋白酶消化法分别培养奶山羊胎儿成纤维细胞，然后经差速消化法和差速贴壁法分离纯化，最后建立奶山羊胎儿成纤维细胞系。结果表明，原代培养成纤维细胞时贴块培养需培养较长时间才能长出细胞，消化培养24h后即有细胞贴壁但培养液中有较多死细胞。成纤维细胞可在含10%胎牛血清的DMEM培养液中长期培养，传代细胞生长情况良好。该细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。 （3）研究了成纤维细胞的细胞活力、生长曲线、群体倍增时间及核型分析。结果表明成纤维细胞冻存后活力为92.3%，生长状况与冻存前一致；生长曲线呈―S‖形；群体倍增时间为40.4h；染色体2n=60，包括2...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Summary
英文缩略词表
第一部分 文献综述
    引言
    1、同期发情
        1.1 发情机理
        1.2 同期发情的研究进展
        1.3 影响同期发情的因素
    2、组织培养
        2.1 组织培养的原理
        2.2 细胞培养的发展过程
        2.3 细胞系的分类
        2.4 细胞系的鉴定
        2.5 成纤维细胞的生物学特性
        2.6 成纤维细胞系的发展进程
        2.7 细胞培养的影响因素
    3、动物乳腺生物反应器
        3.1 乳腺生物反应器的原理
        3.2 乳腺生物反应器的优点
        3.3 乳腺生物反应器的发展进程
        3.4 乳腺生物反应器的不足
    4、性别鉴定
        4.1 性别鉴定的优点
        4.2 性别决定的分类
        4.3 性别鉴定的方法
        4.4 利用 SRY 基因进行性别鉴定
        4.5 性别鉴定的发展进程
        4.6 性别鉴定的发展前景
    5、研究目的及意义
第二部分：试验部分
    试验一：奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立
        引言
        1 试验材料
            1.1 主要试剂
            1.2 试验器材
            1.3 试验动物
            1.4 常用试剂配制
        2 试验方法
            2.1 奶山羊的同期发情
            2.2 奶山羊胎儿成纤维细胞的分离和体外培养
        3 结果与分析
            3.1 同期发情结果
            3.2 不同培养方法培养原代成纤维细胞的结果
            3.3 细胞形态学观察
            3.4 成纤维细胞冻存前与复苏后的细胞存活率
        4 讨论
    试验二:奶山羊胎儿成纤维细胞系的生物学特性分析
        引言
        1 试验材料
            1.1 主要试剂
            1.2 试验器材
            1.3 常用试剂配制
        2 试验方法
            2.1 细胞生物学特性分析
            2.2 微生物污染检测
        3 结果与分析
            3.1 成纤维细胞生长的动态观察
            3.2 成纤维细胞染色体观察
            3.3 微生物污染检测结果
        4 讨论
    试验三：奶山羊胎儿成纤维细胞 SRY-PCR 法性别鉴定
        引言
        1 试验材料
            1.1 主要试剂
            1.2 试验器材
            1.3 常用试剂配制
        2 试验方法
            2.1 引物设计
            2.2 奶山羊胎儿成纤维细胞 DNA 提取
            2.3 公羊、母羊血液采集及 DNA 提取
            2.4 提取 DNA 的检测
            2.5 梯度 PCR 反应体系及反应条件
            2.6 普通 PCR 反应体系及反应条件
            2.7 SRY 基因 PCR 产物胶回收
            2.8 载体连接
            2.9 转化感受态细胞
            2.10 蓝白斑筛选
            2.11 菌液 PCR 检测
            2.12 序列测定
        3 结果与分析
            3.1 引物设计结果
            3.2 性别鉴定结果
            3.3 测序结果
        4 讨论
全文结论
参考文献
附录
致谢
个人简介
导师简介



本文编号：3856569