双峰驼PIGR和FCGRT的基因克

发布时间：2023-10-29 09:20

　　机体黏膜生态系统主要由黏膜和其表面的微生态系统构成,是抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。pIgR和FcRn是黏膜生态系统中参与黏膜免疫应答的重要效应分子,能够转运相应抗体到黏膜表面,并能中和清除病原,以维持黏膜生态系统中正常的微生物菌群和生理环境。呼吸道、消化道和泌尿生殖道等器官的多种细胞能够合成pIgR和FcRn,并在特定部位参与黏膜免疫应答。扁桃体(包括腭扁桃体、咽扁桃体、舌扁桃体、软腭扁桃体、会厌扁桃体、咽鼓管扁桃体)在不同动物呼吸道中的存在情况不同,并且作为重要的黏膜相关淋巴组织(Mucosa-associated lymphoid tissues,MALT)在呼吸道黏膜免疫和整个黏膜免疫系统中发挥着重要的作用。以上6种扁桃体在双峰驼中均存在。为了确定pIgR和FcRn在双峰驼各扁桃体中的表达和分布特点以及两种受体在局部黏膜免疫中的生物学功能,同时为进一步探究两种受体在双峰驼和其他动物体内的生物学功能有无物种间差异。本文以6峰健康成年(6¹6岁)阿拉善双峰驼为研究对象,借助生物信息学分析对双峰驼pIgR和FcRnα链的相关生物信息学特性加以分析;克隆得到...

【文章页数】：145 页

【学位级别】：博士

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摘要
SUMMARY
英文缩略词表
第一部分 文献综述
    第一章 黏膜免疫系统概述
        1 黏膜免疫系统的构成形式
        2 黏膜免疫系统的作用机制
            2.1 黏膜免疫系统的抗原摄取和抗原递呈
            2.2 黏膜免疫系统的免疫应答机制
        3 黏膜免疫耐受机制
    第二章 pIgR和FcRn在黏膜免疫系统中的作用
        1 pIgR和FcRn概述
        2 pIgR的生物学特性
            2.1 pIgR的组成结构
            2.2 PIGR基因的定位和结构
            2.3 pIgR的主要功能
            2.4 pIgR的组织表达特点
            2.5 pIgR的表达调控
        3 FcRn的生物学特性
            3.1 FcRn的组成结构
            3.2 FCGRT基因的结构与定位
            3.3 FcRn的主要功能
            3.4 FcRn的组织表达特点
            3.5 FcRn的表达调控
    第三章 扁桃体的构成和功能
        1 扁桃体的种类
            1.1 腭扁桃体
            1.2 舌扁桃体
            1.3 咽扁桃体
            1.4 软腭扁桃体
            1.5 会厌扁桃体
            1.6 咽鼓管扁桃体
        2 扁桃体对机体的重要保护作用
        3 双峰驼在免疫方面的特殊性及其扁桃体相关研究
第二部分 实验研究
    第一章 双峰驼FCGRT和PIGR的基因克隆及相关生物信息学分析
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要仪器设备
                1.1.2 主要试剂
                1.1.3 引物合成
            1.2 方法
                1.2.1 总RNA的提取
                1.2.2 去除基因组DNA
                1.2.3 合成c DNA第一链
                1.2.4 扩增及基因片段的回收
                1.2.5 回收片段加A并回收
                1.2.6 连接p MD18-T
                1.2.7 DH5a感受态细胞的制备
                1.2.8 转化感受态细胞
                1.2.9 阳性克隆的鉴定和测序
            1.3 生物信息学分析
                1.3.1 理化性质
                1.3.2 亚细胞定位分析
                1.3.3 跨膜情况预测
                1.3.4 信号肽预测
                1.3.5 磷酸化位点预测
                1.3.6 一级结构预测
                1.3.7 二级结构预测
                1.3.8 三维结构预测
                1.3.9 序列同源性分析
                1.3.10 进化分析
        2 实验结果
            2.1 总RNA的抽提
            2.2 目的基因的PCR扩增
            2.3 重组质粒的菌液PCR鉴定
            2.4 克隆所得双峰驼FcRn α 链和pIgR CDS区的序列信息
                2.4.1 FCGRT α 链CDS区序列
                2.4.2 PIGR CDS区序列
            2.5 双峰驼FcRnα链和pIgR的理化性质与亚细胞定位分析
            2.6 双峰驼FcRnα链和pIgR跨膜情况预测
            2.7 双峰驼FcRnα链和pIgR信号肽预测
            2.8 双峰驼FcRnα链和pIgR磷酸化位点预测
            2.9 双峰驼FcRnα链和pIgR一级结构预测
            2.10 双峰驼FcRnα链和pIgR二级结构预测
            2.11 双峰驼FcRnα链和pIgR三维结构预测
            2.12 克隆所得双峰驼FcRnα链和pIgR CDS区的同源性分析
            2.13 克隆所得双峰驼FcRnα链和pIgR的进化树构建
        3 讨论
            3.1 亚细胞定位
            3.2 一级结构
            3.3 二级结构
            3.4 三级结构
            3.5 同源性分析
        4 小结
    第二章 PIGR和FCGRT在双峰驼扁桃体中的表达特点及其与黏膜免疫的关系
        1 材料方法
            1.1 主要试剂
            1.2 主要仪器
            1.3 主要耗材
        2 实验方法
            2.1 RNA提取
            2.2 逆转录
                2.2.1 总RNA中基因组DNA的去除
                2.2.2 逆转录
                2.2.3 c DNA的稀释与保存
            2.3 荧光定量PCR检测
                2.3.1 引物合成
                2.3.2 PCR反应体系的配制
                2.3.3 荧光定量PCR循环条件
        3 结果
            3.1 双峰驼扁桃体总RNA的提取
            3.2 FCGRT在双峰驼扁桃体中的表达情况
            3.3 PIGR在双峰驼扁桃体中的表达情况
        4 讨论
        5 小结
    第三章 成年双峰驼扁桃体中pIgR和FcRn的细胞分布及其与黏膜免疫的关系
        实验一 成年双峰驼扁桃体中pIgR的细胞分布及其与黏膜免疫的关系
            1 材料与方法
                1.1 材料
                    1.1.1 实验动物
                    1.1.2 药品与试剂
                    1.1.3 主要仪器设备
                1.2 方法
                    1.2.1 样品采集
                    1.2.2 石蜡切片
                    1.2.3 间接免疫组织化学（SABC）染色
                    1.2.4 数据的获取及分析
            2 结果
                2.1 同一器官不同区域pIgR阳性细胞密度的比较
                2.2 不同器官同一区域pIgR阳性细胞密度的比较
                    2.2.1 滤泡区
                    2.2.2 滤泡间区
                    2.2.3 上皮下区
                    2.2.4 网状上皮下区
                    2.2.5 腺体周围区
            3 讨论
            4.小结
        实验二 成年双峰驼扁桃体中FcRn的细胞分布及其与黏膜免疫的关系
            1 材料与方法
            2 结果
                2.1 同一器官不同区域FcRn阳性细胞密度的比较
                2.2 不同器官同一区域FcRn阳性细胞密度的比较
                    2.2.1 滤泡区
                    2.2.2 滤泡间区
                    2.2.3 网状上皮下区
                    2.2.4 腺体周围区
                    2.2.5 上皮下区
            3 讨论
            4 小结
        实验三 成年双峰驼扁桃体同部位pIgR和FcRn阳性细胞的分布及其与黏膜免疫的关系
            1 材料与方法
            2 结果
                2.1 同器官同区域pIgR和FcRn阳性细胞密度比较
                    2.1.1 腭扁桃体
                    2.1.2 咽扁桃体
                    2.1.3 会厌扁桃体
                    2.1.4 软腭扁桃体
                    2.1.5 咽鼓管扁桃体
                    2.1.6 舌扁桃体
            3 讨论
            4 小结
第三部分 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3857783