小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用

发布时间：2023-11-04 09:46

　　旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标记荧光基团。对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品。结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板。对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6%,蓝舌病病毒的感染率为13.1%,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7%～100%,特异性为100%。表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 毒株来源
        1.1.2 主要试剂及仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 标准品的制备
        1.2.3 多重荧光RT-LAMP反应
            (1)核酸抽提
            (2)RT-LAMP反应
        1.2.4 干扰性试验
        1.2.5 临床样品的检测
2 结果
    2.1 特异性试验结果
    2.2 敏感性试验结果
    2.3 干扰性试验结果
    2.4 临床样品的检测
3 讨论



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