胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒2型毒株分离及脱脂奶粉中抗体的检测

发布时间：2023-11-12 12:49

　　本研究旨在对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)进行分离及鉴定。利用BVDV抗原和抗体检测试剂盒检测,提取胎牛血清中的病毒RNA,用5′-UTR巢式PCR进行扩增,PCR扩增产物连接pMD19-T进行测序分析。胎牛血清样品接种MDBK细胞,进行细胞传代培养,通过细胞分离培养、直接免疫荧光抗体检测对实验室进口胎牛血清样品进行病毒分离及鉴定,应用DNAStar对BVDV 5′-UTR、N^pro与GenBank中公布的瘟病毒参考株进行多序列比对,采用Mega 6.0进行遗传进化分析。同时通过包被脱脂奶粉进行间接ELISA检测其中的BVDV抗体。结果显示,胎牛血清中BVDV抗原和抗体均为阳性,并且从胎牛血清中成功分离到一株新的牛源BVDV,命名为BVDV-GC株,该病毒株在MDBK细胞上进行增殖培养时未能引起细胞病变;5′-UTR与N^pro PCR扩增为阳性,扩增产物大小均与预期相符;直接免疫荧光检测荧光信号为阳性;病毒滴度为10^-3.6TCID₅₀/0.1 mL;遗传进化分析表明,该分离株与USM...

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞
        1.1.2 主要试剂及仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计及合成
        1.2.2 抗原抗体ELISA检测和反转录PCR
        1.2.3 病毒的分离
        1.2.4 抗原性检测
        1.2.5 病毒TCID50测定
        1.2.6 遗传进化分析
        1.2.7 间接ELISA检测脱脂奶粉中BVDV抗体
2 结 果
    2.1 抗原抗体ELISA检测和反转录PCR检测结果
    2.2 抗原检测
    2.3 病毒TCID50测定
    2.4 遗传进化分析
    2.5 间接ELISA结果
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3863187