IL-1Ra/IL-1β试纸条检测方法建立及其在布鲁氏菌病感染与免疫鉴别诊断中的应用探讨

发布时间：2023-11-26 16:29

　　白细胞介素简称白介素(Interleukin,IL),是一类多由白细胞产生的细胞因子的总称。其中,白介素-1家族(Interleukin-1 family,IL-1F)参与机体免疫过程并在炎症反应中起重要作用。白介素1β(IL-1β)和其受体拮抗因子(IL-1Ra)是IL-1F中最重要的成员。炎症反应过程中,IL-1β表达量增多,促进炎症进程;IL-1Ra常与其呈拮抗趋势,抑制IL-1β生物学功能。IL-1Ra与IL-1β间的拮抗作用引起其比值(IL-1Ra/IL-1β)在许多疾病的诊断、治疗等过程中具有重要指示意义,例如骨关节炎、布鲁氏菌病等。布鲁氏菌病(简称布病)是危害严重的人兽共患流行病。由于目前没有可靠的区别布病感染与免疫鉴别诊断方法,大量布病免疫动物因检测血清布病抗体反应阳性而被当作布病患病动物扑杀,带来巨大经济损失。本课题组前期发现,IL-1β和IL-1Ra的表达量在布病中呈现明显变化,进一步研究表明,IL-1Ra/IL-1β比值在布病自然感染动物与人工免疫动物中差异显著,因此提出,IL-1Ra/IL-1β可能对区别布病感染与免疫鉴别诊断具有重要指示意义。基于前期研究成果,...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
abstract
英文缩写词表
前言
第一篇 文献综述
    第1章 白细胞介素
    第2章 IL-1β与 IL-1Ra的平衡与疾病的关系
        2.1 与支气管哮喘之间的关系
        2.2 IL-1β与抑郁症之间的关系
        2.3 与糖尿病之间的关系
        2.4 与关节炎的关系
        2.5 与布鲁氏菌病的关系
    第3章 布鲁氏菌病
    第4章 IL-1Ra与 IL-1β检测方法
第二篇 研究内容
    第1章 IL-1β和 IL-1Ra全长及结构域蛋白的表达与制备
        1.1 材料
            1.1.1 耗材
            1.1.2 仪器设备
            1.1.3 主要试剂制备
        1.2 方法
            1.2.1 质粒提取
            1.2.2 重组蛋白的表达
            1.2.3 重组蛋白的纯化
        1.3 结果
            1.3.1 重组蛋白的表达
            1.3.2 重组蛋白的纯化
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 IL-1β和 IL-1Ra多克隆抗体的制备
        2.1 材料
            2.1.1 耗材
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂制备
        2.2 方法
            2.2.1 动物免疫
            2.2.2 抗体效价检测
            2.2.3 多克隆抗体的纯化
            2.2.4 抗体特异性分析
        2.3 结果
            2.3.1 抗体效价检测
            2.3.2 抗体的纯化
            2.3.3 抗体的特异性分析
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 IL-1Ra/IL-1β双 T线胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立
        3.1 材料
            3.1.1 耗材
            3.1.2 主要仪器设备
            3.1.3 主要溶液配制
        3.2 方法
            3.2.1 胶体金溶液制备与鉴定
            3.2.2 IL-1β-1Ra2 多克隆抗体除盐处理
            3.2.3 胶体金探针制备与优化
            3.2.4 胶体金试纸条组装
            3.2.5 NC膜优化
            3.2.6 双T线抗体工作浓度优化
            3.2.7 试纸条标准曲线的建立
            3.2.8 回收率试验与最低检测限的确定
            3.2.9 重复性试验
            3.2.10 与市售试剂盒比较
        3.3 结果
            3.3.1 胶体金溶液分析
            3.3.2 胶体金探针鉴定与优化
            3.3.3 NC膜的优化
            3.3.4 双T线抗体工作浓度优化
            3.3.5 试纸条标准曲线的建立
            3.3.6 回收率试验与最低检测限的确定
            3.3.7 重复性试验
            3.3.8 与市售试剂盒比较
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第4章 IL-1Ra/IL-1β双 T线胶体金免疫层析试纸条临床实际样品检测应用分析
        4.1 材料
            4.1.1 样品采集
            4.1.2 耗材、仪器设备
        4.2 方法
            4.2.1 样品处理
            4.2.2 样品检测与灰度分析
            4.2.3 数据统计学分析
        4.3 结果
            4.3.1 部分血清样本虎红平板凝集试验结果
            4.3.2 羊血清IL-1β和 IL-1Ra检测分析
            4.3.3 临床样本检测的统计学分析
        4.4 讨论
        4.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介及科研成果
致谢



本文编号：3868141