H5N8亚型禽流感病毒HA基因和NA基因核酸标准物质的制备及分析

发布时间：2023-11-27 19:01

　　为了提高H5N8亚型禽流感病毒核酸检测结果的准确性,试验按照国家标准GB/T 19438.1—2004和GB/T 19438.2—2004选出禽流感病毒H5N8亚型毒株,根据HA和NA基因全长序列分别设计特异性引物进行扩增;利用基因克隆和体外转录技术制备出H5N8亚型禽流感病毒检测用核酸标准物质,并测定其浓度和纯度;采用实时荧光定量RT-PCR方法对体外转录产物HA-cRNA、NA-cRNA进行验证并绘制标准曲线;检测HA-cRNA、NA-cRNA的均匀性和稳定性,并通过协作标定方式对其含量及不确定度进行分析。结果表明:H5N8亚型禽流感病毒HA和NA基因片段大小为1 704 bp和1 413 bp,与预期大小一致。H5N8亚型禽流感病毒核酸标准物质HA基因的OD₂₆₀/OD₂₈₀值为1.93,浓度为11.32 ng/μL;NA基因的OD₂₆₀/OD₂₈₀值为2.06,浓度为14.24 ng/μL。体外转录产物HA-cRNA、NA-cRNA均有典型的扩增曲线,HA基因标准曲线回归方程为y=-3.59...

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 毒株
    1.2 主要试剂与菌株
2 方法
    2.1 毒株选定与引物设计
    2.2 HA和NA基因扩增和克隆
    2.3 HA和NA基因体外转录
    2.4 体外转录产物浓度及纯度的测定
    2.5 体外转录产物验证
    2.6 均匀性试验
    2.7 稳定性试验
    2.8 联合标定与不确定度分析
3 结果与分析
    3.1 HA和NA基因扩增
    3.2 重组质粒扩增
    3.3 体外转录产物浓度、纯度测定
    3.4 体外转录产物验证
    3.5 均匀性试验
    3.6 稳定性试验
    3.7 联合标定和不确定度分析
4 讨论与结论



本文编号：3868389