鸭卵黄囊膜IgY Fc受体基因的克隆与表达研究

发布时间：2023-12-09 13:32

　　鸭母源抗体能够通过卵黄囊垂直传播至刚孵化的雏鸭,发挥免疫应答功能。其中IgY的含量最为丰富。我们推测鸭卵黄囊膜上存在能够转运IgY的受体。对哺乳动物FcRn和鸡FcRy特性的研究,发现两种受体结合抗体均具有pH依赖性,即在酸性条件下与抗体结合,中性或碱性条件下解离,籍此机制将母源抗体特异性转运至新生动物体内。而鸭IgY被转运至雏鸭体内的过程与此类似,但目前没有关于鸭卵黄囊膜FcRy的相关报道,故对此展开研究。本研究的主要内容如下： 1.鸭FcRy的分离纯化 采用辛酸-硫酸铵法和水溶稀释法,从鸭蛋黄中粗提卵黄IgY,纯化获得了鸭完整型IgY,其重链约67KDa,轻链约25KDa。进一步制备鸭IgY-亲和层析柱,通过调节不同pH值,从鸭卵黄囊膜分离纯化获得了鸭FcRy,其大小约为180KDa。 2.鸭FcRy全长基因的克隆与序列分析 从24-25日龄鸭胚中剥离卵黄囊膜,提取总RNA,经过RT-PCR分5段扩增编码鸭FcRy的基因片段,将5个目的基因片段分别连接至pMD18-T载体后测序,拼接获得了鸭FcRy全长基因,大小为6293bp,与已报道的鸭磷脂酶A2受体基因核苷酸同源性为99%。 ...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语
1 文献综述
    1.1 鸭卵黄抗体IgY的研究
        1.1.1 IgY的结构
        1.1.2 IgY的功能
        1.1.3 鸭IgY的粗提与纯化
    1.2 哺乳动物新生儿Fc受体(FcRn)的研究
    1.3 鸡卵黄囊膜IgY Fc受体(FcRy)的研究
        1.3.1 鸡FcRy的结构
        1.3.2 鸡FcRy的分离纯化与克隆
        1.3.3 鸡FcRy与IgY结合的特点
        1.3.4 鸡FcRy的胞转机制
2 研究目的及意义
3 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株及细胞
        3.1.2 载体与质粒
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 实验动物
        3.1.5 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 分离纯化鸭FcRy
        3.2.2 鸭FcRy全长基因的克隆
        3.2.3 FcRy-CF基因亚克隆
        3.2.4 原核表达质粒的构建
        3.2.5 重组原核表达质粒的诱导表达
        3.2.6 融合蛋白的纯化
        3.2.7 多克隆抗体的制备及纯化
        3.2.8 Western blot检测鸭各组织的分布
        3.2.9 免疫组化研究FcRy在鸭各组织中的分布
4 实验结果
    4.1 从鸭卵黄囊膜上分离纯化鸭FcRy
        4.1.1 鸭完整型IgY的粗提与纯化
        4.1.2 分离纯化鸭FcRy
    4.2 鸭FcRy基因的克隆与序列分析
        4.2.1 鸭FcRy全长基因分段克隆与序列分析
        4.2.2 鸭FcRy同源性分析
    4.3 FcRy-CF基因的亚克隆与序列分析
        4.3.1 FcRy-CF基因的亚克隆
        4.3.2 FcRy-CF基因的鉴定、测序及序列分析
    4.4 融合蛋白的原核表达与纯化
    4.5 多克隆抗体的制备
        4.5.1 抗体效价的测定(间接ELISA法)
        4.5.2 Western blot检测多克隆抗体特异性
    4.6 多克隆抗体的纯化及鉴定
    4.7 Western blot方法检测鸭FcRy在各组织中的表达
    4.8 SABC法检测FcRy在鸭体内的分布研究
        4.8.1 最佳反应条件的确定
        4.8.2 FcRy在鸭体内的分布情况
5 讨论
    5.1 从鸭卵黄囊膜上分离纯化得到鸭FcRy
    5.2 鸭FcRy基因的克隆与序列分析
    5.3 鸭FcRy-CF基因的亚克隆及表达
    5.4 兔抗鸭FcRy多克隆抗体的制备与纯化
    5.5 免疫组织化学方法检测鸭FcRy在鸭体内的表达与分布情况
6. 结论
参考文献
附录1
附录2
附录3
附录4
附录5
附录6
附录7
致谢



本文编号：3871674