绒山羊初级毛囊毛乳头细胞减血清培养条件的建立及BIO对毛乳头细胞诱导能力的影响

发布时间：2023-12-09 19:33

　　毛乳头(dermal papilla,DP)控制着毛囊(hair follicle)的再生和大小,被认为是毛囊生长和毛囊周期的控制中枢,使其成为研究毛囊形态发生发育机制的优良模型。但是体外培养的毛乳头细胞贴壁及迁出时间较长且效率较低影响实验效率,使其作为研究毛囊周期机制的试验材料受到限制。本试验旨在探索培养毛乳头细胞最适培养基及最适血清添加比例,以此来提高其培养效率。结果如下:(1)通过显微解剖法剥离陕北白绒山羊生长期初级毛囊毛乳头并进行体外原代培养,利用细胞免疫荧光染色的方法检测毛乳头细胞中CD133、α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),结果证实所培养的细胞为毛乳头细胞。在常规培养DMEM/F12(dulbecco’s modified eagle media/nutrient mixture F-12)(1∶1)与DMEM/F-12 GlutaMAX、减血清培养基Advanced DMEM/F-12与Advanced RPMI 1640(roswell park memorial institute(RPMI)1640),四种培养基加入不同...

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摘要
abstract
第一章 绒山羊毛囊毛乳头细胞的培养与诱导能力分子调控
    1.1 引言
    1.2 绒山羊毛囊毛乳头细胞培养
        1.2.1 绒山羊毛囊类型与结构
        1.2.2 毛囊周期性变化
        1.2.3 毛乳头细胞分离培养
        1.2.4 细胞培养的研究进展
    1.3 毛乳头细胞诱导毛囊周期性变化的分子调控
        1.3.1 调控毛囊形态发育的信号通路
        1.3.2 Wnt/β-catenin信号通路
        1.3.3 糖原合成酶激酶-3β抑制剂(BIO)的功能作用
    1.4 研究的目的与意义
第二章 绒山羊初级毛囊毛乳头细胞减血清培养条件的建立
    2.1 材料
        2.1.1 主要试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 样品的采集和预处理
        2.2.2 毛乳头细胞的剥离与培养
        2.2.3 毛乳头细胞形态学观察与免疫荧光鉴定
        2.2.4 毛乳头细胞生长曲线的绘制
        2.2.5 MTT法检测毛乳头细胞活力
        2.2.6 测定毛乳头细胞的AKP活性
        2.2.7 数据处理
    2.3 结果与分析
        2.3.1 毛乳头细胞体外培养
        2.3.2 毛乳头细胞的免疫荧光鉴定
        2.3.3 添加10%血清条件下四种培养基的培养效果
        2.3.4 四种培养基的最适血清添加比例
        2.3.5 添加适宜血清浓度四种培养基的培养效果
    2.4 讨论
        2.4.1 陕北白绒山羊的初级毛囊毛乳头细胞的分离与鉴定
        2.4.2 最适培养基与最适血清添加比例的探索
    2.5 小结
第三章 糖原合成酶激酶-3β抑制剂(BIO)对毛乳头诱导能力的影响
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂及配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 样品的采集和预处理
        3.2.2 毛乳头细胞的剥离、培养
        3.2.3 毛乳头细胞形态学观察与免疫荧光鉴定
        3.2.4 CCK8法检测毛乳头细胞活力
        3.2.5 测定毛乳头细胞的AKP活性
        3.2.6 实时荧光定量PCR
        3.2.7 蛋白免疫印迹
        3.2.8 数据处理
    3.3 结果与分析
        3.3.1 毛乳头细胞免疫荧光鉴定
        3.3.2 添加不同浓度BIO对毛乳头细胞增殖能力的影响
        3.3.3 添加不同浓度BIO毛乳头细胞诱导能力的影响
        3.3.4 添加适宜浓度的BIO对毛乳头细胞诱导能力相关基因mRNA表达的影响
        3.3.5 添加适宜浓度的BIO对毛乳头细胞诱导能力相关基因蛋白的影响
    3.4 讨论
        3.4.1 毛乳头细胞的分离鉴定
        3.4.2 BIO对毛乳头细胞诱导能力的影响
    3.5 小结
第四章 总结
    4.1 结论
    4.2 创新点
    4.3 下一步研究建议
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：3872017