新城疫病毒F蛋白与鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的共表达、纯化及免疫原性

发布时间：2023-12-11 18:37

　　目的共表达新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F蛋白与鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白,纯化并分析其免疫原性。方法根据NCBI中NDV F及IBV S1片段基因序列,截取包含F及S1蛋白部分抗原表位基因片段,设计并合成引物,PCR扩增目的片段,依次连接至原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a-F-S1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化,SDS-PAGE分析目的蛋白可溶性;重组蛋白经Ni-NTA agarose层析纯化复性后,Western blot法检测其反应原性。将14日龄雏鸡随机分F-S1、NDV F、IBV S1及PBS组,肌内免疫3轮,间隔10 d,每轮连续免疫5 d,每日1次,100μg/只,首次免疫后每隔7 d采集血清,ELISA法检测雏鸡血清特异性IgG水平。结果经双酶切鉴定,重组质粒p ET-32a-F-S1构建正确。重组蛋白最适IPTG诱导浓度为0. 2 mmol/L,时间为3 h;其以包...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒、载体及菌株
    1.2 实验动物及鸡胚
    1.3 主要试剂
    1.4 引物设计及合成
    1.5 目的基因的扩增及克隆质粒的构建
    1.6 pET-32a-F-S1重组质粒的构建
    1.7 重组蛋白F-S1的诱导表达
    1.8 表达产物可溶性分析
    1.9 重组蛋白的纯化及复性
    1.1 0 纯化重组蛋白的鉴定
    1.1 1 动物分组及免疫
    1.1 2 雏鸡血清IgG抗体水平的检测
    1.1 3 统计学分析
2 结果
    2.1 目的基因的鉴定
    2.2 重组质粒pET-32a-F-S1的鉴定
    2.3 重组蛋白F-S1的最适诱导条件
    2.4 表达产物的可溶性
    2.5 纯化重组蛋白的鉴定
    2.6 雏鸡血清IgG抗体水平
3 讨论



本文编号：3873129