日本乙型脑炎病毒感染中CD209A、CD209B对树突状细胞功能的影响

发布时间：2023-12-11 19:08

　　日本乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的一种人畜共患病,简称乙脑。JEV是黄病毒属的成员之一,主要通过库蚊传播。虽然JEV疫苗已广泛使用,但迄今,其传播范围仍然在不断扩大。为了研究JEV的致病机理并为日本乙型脑炎提供更好的治疗方法,本研究以DC-SIGN(Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule-3-Grabbing Non-integrin,DC-SIGN)家族为切入点,以小鼠为感染模型,探究在JEV感染后DC-SIGN发挥的免疫功能。基于前期RNA测序结果,我们利用JEV P3强毒株和SA14-14-2疫苗株感染小鼠第3天的脾脏样品,对DC-SIGN家族中表达有变化的3个成员DC-SIGN(CD209A)、DC-SIGNR1(CD209B)和DC-SIGNR2(CD209C)进行了验证。相对于对照组小鼠,CD209A在P3感染小鼠脾脏中的CD11c⁺树突状细胞、F4-80

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
1 文献综述
    1.1 日本乙型脑炎简介
    1.2 日本乙型脑炎的发现
    1.3 日本乙型脑炎的流行病学
        1.3.1 日本乙型脑炎的流行与分布
        1.3.2 日本乙型脑炎的传播
    1.4 日本乙型脑炎的病原学特征
        1.4.1 日本乙型脑炎病毒的分子结构
        1.4.2 日本乙型脑炎病毒的复制
        1.4.3 日本乙型脑炎病毒的致病过程
    1.5 日本乙型脑炎的临床症状及诊断
    1.6 日本乙型脑炎的防控及疫苗的研究进展
    1.7 日本乙型脑炎病毒感染引起的免疫应答
        1.7.1 先天性免疫应答
        1.7.2 适应性免疫应答
    1.8 树突状细胞在日本乙型脑炎病毒感染中的功能
        1.8.1 不同DCs亚群在日本乙型脑炎病毒感染中的功能
        1.8.2 DCs对日本乙型脑炎病毒的摄取、处理和提呈
        1.8.3 DCs培养及细胞系
    1.9 DC-SIGN分子在黄病毒感染中的功能
        1.9.1 DC-SIGN分子的发现
        1.9.2 DC-SIGN分子的表达及配体
        1.9.3 DC-SIGN分子在黄病毒感染中的功能
        1.9.4 DC-SIGN分子家族
2 目的与意义
3 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 病毒、质粒、菌株、细胞系和实验动物
        3.1.2 主要药品和试剂
        3.1.3 培养基及其配制
        3.1.4 溶液及其配制
        3.1.5 实验所用手术器械
        3.1.6 重要仪器及设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞的复苏和培养
        3.2.2 JEV的扩增与毒价滴定
        3.2.3 JEV-P3和SA14-14-2感染C57BL/6小鼠
        3.2.4 小鼠脾脏单细胞悬液的制备
        3.2.5 细胞表面染色
        3.2.6 RNA的提取与DNA的去除
        3.2.7 反转录PCR
        3.2.8 荧光定量PCR
        3.2.9 BMDCs细胞的制备
        3.2.10常规分子克隆实验
        3.2.11 脂质体转染细胞的方法
        3.2.12 构建稳定表达DC2.4细胞系
        3.2.13 相关引物的设计与合成
        3.2.14体外细胞共培养实验
        3.2.15 荧光定量PCR检测JEV拷贝数
        3.2.16 流式细胞术数据分析
        3.2.17 数据统计分析
        3.2.18 手术器械消毒
        3.2.19 实验动物伦理声明
        3.2.20 实验动物及废物无害化处理
4 结果与分析
    4.1 JEV-P3株和SA14-14-2株毒价的测定
    4.2 JEV感染对DC-SIGN分子家族表达的影响
        4.2.1 JEV感染对DC-SIGN分子家族表达的影响
        4.2.2 JEV感染对CD209A分子表达的影响
        4.2.3 JEV感染对CD209B分子表达的影响
        4.2.4 JEV感染对CD209C分子表达的影响
    4.3 CD209A、CD209B在小鼠骨髓来源树突状细胞上的表达
        4.3.1 小鼠骨髓来源树突状细胞的培养
        4.3.2 CD209A和CD209B在小鼠骨髓来源树突状细胞上的表达
    4.4 稳定表达CD209A、CD209B的DC2.4细胞系的构建及鉴定
        4.4.1 稳定表达CD209A的DC2.4细胞系的构建及鉴定
        4.4.2 稳定表达CD209B的DC2.4细胞系的构建及鉴定
    4.5 CD209A、CD209B对JEV感染的影响
    4.6 CD209A、CD209B对T细胞增殖的影响
        4.6.1 JEV感染对EL-4细胞增殖的影响
        4.6.2 CD209A对EL-4细胞增殖的影响
        4.6.3 CD209B对EL-4细胞增殖的影响
5 讨论
    5.1 JEV感染抑制CD209A的表达
    5.2 JEV感染促进CD209B的表达
    5.3 树突状细胞成熟状态与CD209A、CD209B表达的关系
    5.4 CD209A促进JEV的复制
    5.5 CD209A、CD209B促进T细胞的增殖
6 结论
参考文献
致谢



本文编号：3873189