马鹿Zfy基因干扰载体筛选及性控效果的研究

发布时间：2024-06-24 19:19

　　Y染色体在动物性别决定和精子发生过程中发挥着至关重要的作用,Zfy基因位于Y染色体短臂上,编码锌指蛋白,最新研究中被确认决定圆形精子能否最终发育成为可供自然受精的精子,与Y精子的正常发生有关。马鹿作为特种经济动物在新疆生产建设兵团有多年养殖历史,马鹿养殖效益核心是鹿茸的销售,公鹿的大量繁殖和饲养是鹿场主要运营模式。然而鹿茸市场波动频繁,去母留公在鹿茸市场疲软时属于常态,而随着市场转暖,通过控制马鹿后代性别,在短时间内多生母鹿达到快速扩繁的目的,当母鹿存栏量达到一定基数时再控制多生公鹿,是鹿场在市场激烈竞争中降低成本提高收益的重要手段。目的:设计马鹿Zfy基因shRNA片段,构建并筛选出高效马鹿Zfy基因shRNA表达载体,将所筛选出的重组载体注射进种公鹿睾丸内,以期在配种时间内干扰、抑制睾丸内Zfy基因表达,影响Y精子的正常生成,而不影响X精子的生成,为X精子提供更多的受精机会,从而达到多生母鹿的效果。方法:(1)对马鹿Zfy基因mRNA序列进行siRNA设计和筛选,将筛选出的siRNA分别连接到RNA干扰真核表达载体中,将构建好的重组表达载体进行马鹿体外生精细胞培养RNAi试验,利用...

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图1-1PGenesil1.3表达载体图谱

图1-1PGenesil1.3表达载体图谱Fig1-1TheRestrictionMapofPGenesil1.3NA序列的设计和筛选据马鹿Zfy基因（GenBank：KU041539.1），通过Gene.exe基因序列分

图1-2引物扩增方向Fig1-2Directionofprimeramplification

每2个shRNA共用一个表达载体，与常规单位点质粒载体不同，所插入得2个shRNA，需要设计两对引物，其中A与B引物，扩增TTTTTT---Mir305’之间序列；C与D引物，扩增Mir303’---U6之间序列，引物扩增序列方向如图1-2所示：图1-2引物扩增方向Fig1....

图1-3两对引物扩增结果

25图1-3两对引物扩增结果Fig1-3Amplificationresultsoftwopairsofprimers3.3连接反应结果及质粒命名两组PCR产物纯化后经BsaI酶切，T4连接酶4℃放置过夜连接，为方便记录将连接产物ZFY202+17591P2....

图1-4重组质粒酶切结果

由于PGenesil1.3表达载体具有1个PstI的酶切位点，所设计PCR引物中加入了1个PstI，所以用PstI内切酶对重组质粒1和重组质粒2进行酶切，可以切出一条约1800bp大小条带，说明目的基因片段已经分别插入到质粒载体中(如图1-4所示)。图1-4重组质粒酶切结果Fi....

本文编号：3995652