牛溶血性曼氏杆菌小鼠感染模型建立及灭活疫苗免疫原性研究

发布时间：2024-06-25 18:32

　　溶血性曼氏杆菌是动物上呼吸道中共生的常在菌,当存在环境压力或应激等因素时,大量增殖,引起严重的呼吸道感染,且易与病毒和其他细菌混合感染或继发感染。目前,在一些集约牛场中普遍存在,导致重要的经济损失。国外主要采用多价或多联灭活疫苗进行免疫,效果评价不一。我国尚缺乏预防该病的疫苗。本研究从严重呼吸道症状的发病牛和病死牛肺脏和鼻拭子中分离鉴定获得致病菌株,建立小鼠感染模型,进而研制灭活疫苗,确定其安全性和免疫原性,对于规模化牛场该病的预防具有重要的现实意义。首先无菌采集黑龙江省三地牛场发病牛的肺脏和鼻拭子,经病原分离培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定、血清型和毒力因子检测,确定分离株的生物学特性。以鼻腔、腹腔途径,分别采用不同剂量的分离菌株接种清洁级昆明系小白鼠,确定最佳接种方式和致病性,建立小鼠感染模型。选择制备疫苗的致病菌与攻毒菌株,优化培养基和灭活条件,制备蜂胶佐剂、铝佐剂、206佐剂灭活疫苗。小鼠间隔三周皮下接种疫苗2次,通过攻毒试验、ELISA抗体检测、细胞因子QRT-PCR检测等方法确定疫苗的安全性和免疫效力。本研究成功分离鉴定三株有较强致病性的溶血性曼氏杆菌,分别命名为JS0...

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【学位级别】：硕士

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图2-1溶血性曼氏杆菌接种血琼脂平板培养基Fig.2-1M.haemolyticawasinoculatedontobloodagar

图2-1溶血性曼氏杆菌接种血琼脂平板培养基Fig.2-1M.haemolyticawasinoculatedontobloodagar

图2-2溶血性曼氏杆菌革兰氏染色Fig.2-2GramstainingofM.haemolytica

图2-2溶血性曼氏杆菌革兰氏染色Fig.2-2GramstainingofM.haemolytica结果为：葡萄糖、果糖、甘露醇、麦芽糖、

图2-3分离菌株16SrDNAPCR扩增结果

图2-3分离菌株16SrDNAPCR扩增结果M:2000Marker;1:JS0165;2:LY02;3:WC16493Fig.2-3PCRamplificationresultsof16SrDNAgeneM:2000Marker;....

图2-4分离菌株分型引物扩增结果

18图2-4分离菌株分型引物扩增结果M：1000Marker;1：JS0165(A6)；2：LY02(A6)；3：WC16493（A1）Fig.2-4PCRamplificationresultsoftheserotypetypingM:1000M....

本文编号：3995736