H9亚型禽流感DNA疫苗的制备及免疫效果评价

发布时间：2024-01-23 13:55

　　禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的主要表现为呼吸道、生殖道损伤和免疫力、产蛋率下降等多种临床症候群的接触性传染病。禽流感病毒是一种负链RNA病毒,属于正黏病毒科A型流感病毒属,根据致病力大小可分为高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)和低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza,LPAI)两大类。H9亚型禽流感属于LPAI,但其感染宿主广泛,感染率较高,往往造成很大的经济损失。血凝素(Hemagglutinin,HA)是禽流感病毒最为重要的表面蛋白之一,是重要的保护性抗原,也是构建DNA疫苗的首选基因。本研究以分离鸭源H9亚型毒株的全长HA基因与真核表达载体pVAX1构建pVAX1-HA DNA疫苗,采用活体电击方法在小鼠、鸡和鸭上进行DNA疫苗的免疫效果评价,并探究DNA疫苗与灭活苗联合使用对免疫效果的影响。1.从鸭样品中分离出的病毒经RT-PCR扩增出HA基因片段,并对其进行测序及遗传进化分析,结果显示该分离毒株为H9亚型禽流感病毒,HA蛋白裂解位...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩写对照表
1 前言
    1.1 AIV的基因组和主要结构蛋白功能
    1.2 H9亚型禽流感的流行病学与危害
    1.3 H9 亚型禽流感DNA疫苗研究
        1.3.1 DNA疫苗的免疫机理
        1.3.2 DNA疫苗与其优点
        1.3.3 禽流感DNA疫苗的研究进展
    1.4 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 病料、载体、细胞和菌种
        2.1.2 血清、灭活疫苗和抗体
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 主要仪器
        2.1.6 主要试剂以及培养基的配制
    2.2 方法
        2.2.1 病毒的分离
        2.2.2 分离毒株血凝价和血凝抑制价的测定
        2.2.3 分离毒株RNA的提取
        2.2.4 分离毒株HA基因的扩增
        2.2.5 HA基因的克隆转化与测序分析
        2.2.6 pVAX1-HA DNA疫苗的构建与制备
        2.2.7 真核表达质粒pVAX1-HA转染与表达蛋白的鉴定
        2.2.8 pVAX1-HA DNA疫苗对小鼠的免疫效果评价
        2.2.9 DNA疫苗对SPF鸡和鸭的免疫效果评价
        2.2.10 DNA疫苗对鸭的免疫效果评价
3 结果
    3.1 H9 亚型禽流感病毒的分离鉴定与测序分析
        3.1.1 分离毒株的HA基因扩增
        3.1.2 重组质粒pMD18-T-HA双酶切鉴定
        3.1.3 HA基因的测序与分析
    3.2 DNA疫苗的制备与鉴定
        3.2.1 真核表达质粒pVAX1-HA双酶切鉴定
        3.2.2 Western blot鉴定重组质粒pVAX1-HA表达
    3.3 不同免疫组实验鼠免疫效果的评价
        3.3.1 小鼠临床体征的观测
        3.3.2 pVAX1-HA DNA疫苗免疫小鼠后抗体的测定
        3.3.3 DNA疫苗免疫小鼠后IL-4、IL-6和IFN-γ浓度的测定
    3.4 DNA疫苗免疫SPF鸡和鸭免疫效果的测定
    3.5 DNA疫苗免疫鸭的抗体测定
4 讨论
    4.1 H9 亚型禽流感病毒的分离鉴定与测序分析
    4.2 pVAX1-HA DNA疫苗的构建及鉴定
    4.3 DNA疫苗对小鼠的免疫效果
    4.4 pVAX1-HA DNA疫苗对SPF鸡和鸭的免疫效果
    4.5 pVAX1-HA DNA疫苗对鸭的免疫效果
全文总结
参考文献
攻读学位期间发表论文
致谢
附录1 pVAX1 表达载体
附录2 分离株HA基因序列



本文编号：3882784