流感病毒H1N1巨噬细胞感染模型建立及病毒核蛋白NP与宿主互作因子的鉴定

发布时间：2024-01-30 04:10

　　流行性感冒(Influenza)是由流感病毒(Influenza virus)引起的一种人畜共患的呼吸道传染病。流感病毒分为A型、B型和C型,其中A型(甲型)流感病毒最为常见。A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是一种分节段的单股负链RNA病毒,它的每个基因片段分别编码不同的蛋白。流感病毒具有高度传染性,能在短时间内迅速蔓延,严重危害人类健康,引起严重的公共卫生安全。巨噬细胞是抗感染免疫中起关键作用的多功能免疫细胞,广泛存在于多种组织中,主要参与病原体识别、清除、抗原加工和呈递、炎症和组织修复以及免疫调节等功能。另一方面,巨噬细胞也是一些病毒直接攻击的靶标细胞,它可以被某些病毒调节和利用,并作为病毒复制增殖、储存及运输的容器和载体,从而有利于病毒感染的建立、传播及长期在组织内持久存在。因此,巨噬细胞是研究病毒感染与宿主细胞免疫反应机制的重要工具和模型,然而关于稳定的流感病毒巨噬细胞直接感染的模型还未有报导。本研究的主要目标是探究巨噬细胞在抗流感病毒感染中的作用及其介导的机制,本研究构建了流感病毒小鼠巨噬细胞感染模型,为研究流感病毒免疫逃逸、调控宿主细胞免疫反应机制...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文献综述
    1 流行性感冒及流行性感冒病毒
        1.1 概述
        1.2 流感病毒基因组编码的蛋白及其功能
        1.3 流感病毒的感染机制与免疫逃逸机制
    2 先天性免疫和获得性免疫
    3 巨噬细胞功能及调控病毒感染作用
        3.1 巨噬细胞免疫学功能
        3.2 巨噬细胞调控病毒感染作用
    4 TLRs信号通路与病毒感染调控
        4.1 Toll样受体
        4.2 TLR4介导的抗病毒免疫
    5 研究目的及意义
第二部分 试验研究
    第一章 流感病毒H1N1巨噬细胞感染模型的建立
        1 实验材料与仪器设备
            1.1 实验试剂
            1.2 实验仪器
            1.3 实验材料、细胞及试剂配制
        2 实验方法
            2.1 流感病毒PR8毒株的培养与鉴定
            2.2 小鼠组织与腹腔细胞中流感病毒抗原表达的检测
            2.3 流感病毒在BMM细胞中的蛋白表达检测
            2.4 流感病毒mRNA在 BMM细胞中的表达检测
            2.5 流感病毒在BMM细胞中的复制动力学研究
            2.6 LPS刺激对流感病毒在BMM细胞中的复制的影响
            2.7 shTLR4 对流感病毒在BMM细胞中的复制的影响
        3 实验结果
            3.1 流感病毒在感染小鼠中的抗原表达分析
            3.2 流感病毒在BMM细胞中的蛋白表达分析
            3.3 流感病毒在BMM细胞中的m RNA表达分析
            3.4 流感病毒在BMM细胞中的复制动力学研究
            3.5 LPS刺激对流感病毒复制的影响
            3.6 shRNA干扰效果鉴定
            3.7 shTLR4对流感病毒复制的影响
        4 讨论
    第二章 BMM细胞中与流感病毒NP蛋白互作的蛋白鉴定
        1 实验仪器与试剂
            1.1 实验试剂
            1.2 实验仪器
            1.3 实验材料、细胞及试剂配制
        2 实验方法
            2.1 免疫沉淀
            2.2 Western blot检测
            2.3 质谱鉴定
        3 实验结果
            3.1 IP免疫印迹结果
            3.2 蛋白质谱结果分析
        4 讨论
全文总结
参考文献
附录
个人简介
致谢



本文编号：3889473