多重PCR同步检测MDV、APV和EDSV的技术研究

发布时间：2024-02-01 09:25

　　家禽养殖在我国具有悠久的历史,随着我国经济快速的发展,养禽业的发展规模与速度与日俱增,而制约其发展的主要难题是禽病,尤其是病毒性疾病。其中APV、 MDV和EDSV是三种鸡的B类传染性疾病。通常,用于检测病原体的主要方法有病毒的分离与鉴定、血清学鉴定以及PCR方法等。本文所要研究的多重PCR方法虽与常规PCR原理相同,但可以用于多种病毒的检测,且与常规单一PCR一样灵敏,是一种快速、有效的检测方法,在病毒检测领域具有广泛的应用市场。 本研究利用DF-1鸡胚成纤维细胞分别增殖了MDV、APV和EDSV,并利用异硫氰酸胍法提取病毒DNA,然后根据三种DNA序列分别设计了1对特异性引物,并将扩增的片段克隆到pMD18-T载体中,以此建立了可同时检测三种病毒的多重PCR方法,并优化了多重PCR反应条件,最终确定了多重PCR反应体系为20μL:0.2μL GoTaq Flexi DNA polymerase(5U/μL),4μL5×GoTaq Flexi buffer,0.4μL dNTP (1OmM),2.4μL MgCl2(25mM), APV-F/R0.4μL,MDV-F/R0.4μL,E...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 马立克氏病毒检测方法的研究进展
        1.1 MDV的分子生物学特征
        1.2 MDV的检测方法
    2 禽痘病毒检测方法的研究进展
        2.1 APV的分子生物学特征
        2.2 APV的检测方法
    3 减蛋综合征病毒的研究进展
        3.1 EDSV的分子生物学特性
        3.2 EDSV的检测方法
    4 多重PCR的发展与应用
第二章 研究内容
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 结果与分析
        3.1 病毒增殖
        3.2 三种病毒的克隆
        3.3 多重PCR反应条件优化
        3.4 特异性检测
        3.5 灵敏度研究
        3.6 实际样品检测结果
        3.7 人工粪便样品检测结果
        3.8 企鹅粪便样品检测结果
    4 讨论
        4.1 多重PCR的建立
        4.2 多重PCR的可行性
        4.3 多重PCR与企鹅病原微生物的检测
    5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3891889