禽呼肠孤病毒感染对体外细胞和SPF鸡细胞因子mRNA转录影响的初步研究
发布时间：2024-02-02 18:28
禽呼肠孤病毒(Avian reovirus, ARV)是重要的家禽病原体之一,主要感染鸡和火鸡,引起鸡病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸障碍综合征、免疫抑制等,给全球养禽业造成巨大的经济损失。但目前关于ARV主要的研究方向是病原分离鉴定、基因组测序、检测方法建立等,而对其分子致病机制的研究报道并不多。为了从根本上有效防控ARV感染,促进全球养禽业的健康发展,开展禽呼肠孤病毒致病机制的研究刻不容缓。细胞因子因具有广泛的生物学活性,是机体免疫应答和炎症反应的重要介质。目前已证明细胞因子在结核病、AIV感染、鸡传染性法氏囊病毒感染、球虫感染等疾病的致病过程中占有重要作用,但细胞因子在ARV感染导致机体广泛炎症和免疫抑制中的致病机制尚不清楚。 为探讨ARV感染对细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ和TNF-α的mRNA转录时相的影响,本研究首先建立了鸡IL-1β、IL-6、IL-17、 IL-18、IFN-γ、TNF-α和GAPDH基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,然后用禽呼肠孤病毒标准强毒株S1133分别感染鸡胚成纤维细胞(CEF)和7日龄SPF雏...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写-中文对照表
第一章 文献综述
1.1 禽呼肠孤病毒研究的进展
1.1.1 禽呼肠孤病毒的概况
1.1.2 禽呼肠孤病毒的基因组和蛋白质
1.1.3 禽呼肠孤病毒的增殖特性
1.1.4 禽呼肠孤病毒的感染与诊断
1.2 细胞因子的研究进展
1.2.1 白细胞介素1β
1.2.2 白细胞介素6
1.2.3 白细胞介素17
1.2.4 白细胞介素18
1.2.5 干扰素-γ
1.2.6 肿瘤坏死因子-α
1.3 鸡CD4、CD8分子研究概述
1.3.1 鸡CD4分子和CD4+T细胞
1.3.2 鸡CD8分子和CD8+T细胞
1.4 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
1.5 本课题研究的意义
第二章 鸡IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ、TNF-α和GAPDH荧光定量PCR检测方法的建立
摘要
2.1 材料与方法
2.1.1 主要仪器与试剂
2.1.2 细胞制备与培养
2.1.3 引物设计与合成
2.1.4 细胞RNA抽提与反转录
2.1.5 标准品制备
2.1.6 反应条件优化
2.1.7 标准曲线的制作
2.1.8 特异性试验
2.1.9 敏感性试验
2.1.10 重复性试验
2.2 结果
2.2.1 质粒标准品的制备
2.2.2 real-time PCR条件优化
2.2.3 标准曲线的制作
2.2.4 特异性试验结果
2.2.5 敏感性试验结果
2.2.6 重复性试验结果
2.3 讨论
第三章 ARV感染对鸡胚成纤维细胞6种细胞因子mRNA转录水平的影响
摘要
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒
3.1.2 主要仪器与试剂
3.1.3 细胞的制备与培养
3.1.4 病毒TCID50测定
3.1.5 病毒感染方法
3.1.6 收集细胞样品
3.1.7 细胞RNA抽提与反转录
3.1.8 样品测定
3.1.9 数据统计分析
3.2 结果
3.2.1 ARV病毒结构蛋白σ C基因的表达变化
3.2.2 IL-1β基因的表达变化
3.2.3 IL-6基因的表达变化
3.2.4 IL-17基因的表达变化
3.2.5 IL-18基因的表达变化
3.2.6 IFN-γ基因的表达变化
3.2.7 TNF-α基因的表达变化
3.2.8 不同接种剂量感染CEF细胞24h后6种细胞因子的表达变化
3.3 讨论
第四章 ARV感染对SPF鸡组织器官中6种细胞因子mRNA转录的影响
摘要
4.1 材料与方法
4.1.1 主要仪器与试剂
4.1.2 病毒
4.1.3 SPF鸡孵化
4.1.4 SPF鸡饲养管理
4.1.5 SPF鸡的人工感染试验
4.1.6 SPF鸡剖检及组织样品采集
4.1.7 组织样品RNA抽提及反转录
4.1.8 Real-time PCR对试验样品的测定
4.1.9 数据处理和统计分析
4.2 结果
4.2.1 感染后临床表现
4.2.2 关节中6种细胞因子的表达变化
4.2.3 心脏中6种细胞因子的表达变化
4.2.4 脾脏中6种细胞因子的表达变化
4.2.5 胸腺中6种细胞因子的表达变化
4.2.6 法氏囊中6种细胞因子的表达变化
4.2.7 外周血中6种细胞因子的表达变化
4.3 讨论
第五章 ARV感染对SPF鸡外周CD4+、CD8+T细胞量的影响
摘要
5.1 材料与方法
5.1.1 仪器与主要试剂
5.1.2 病毒
5.1.3 SPF鸡孵化
5.1.4 SPF鸡饲养管理
5.1.5 SPF鸡的人工感染试验
5.1.6 外周血淋巴细胞样品的制备
5.1.7 流式细胞仪检测分析样品
5.1.8 数据处理
5.2 结果
5.2.1 ARV感染后外周血中CD4+T细胞数的变化
5.2.2 ARV感染后外周血中CD8+T细胞数的变化
5.3 讨论
结论
参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间发表论文情况
本文编号：3892965
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写-中文对照表
第一章 文献综述
1.1 禽呼肠孤病毒研究的进展
1.1.1 禽呼肠孤病毒的概况
1.1.2 禽呼肠孤病毒的基因组和蛋白质
1.1.3 禽呼肠孤病毒的增殖特性
1.1.4 禽呼肠孤病毒的感染与诊断
1.2 细胞因子的研究进展
1.2.1 白细胞介素1β
1.2.2 白细胞介素6
1.2.3 白细胞介素17
1.2.4 白细胞介素18
1.2.5 干扰素-γ
1.2.6 肿瘤坏死因子-α
1.3 鸡CD4、CD8分子研究概述
1.3.1 鸡CD4分子和CD4+T细胞
1.3.2 鸡CD8分子和CD8+T细胞
1.4 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
1.5 本课题研究的意义
第二章 鸡IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ、TNF-α和GAPDH荧光定量PCR检测方法的建立
摘要
2.1 材料与方法
2.1.1 主要仪器与试剂
2.1.2 细胞制备与培养
2.1.3 引物设计与合成
2.1.4 细胞RNA抽提与反转录
2.1.5 标准品制备
2.1.6 反应条件优化
2.1.7 标准曲线的制作
2.1.8 特异性试验
2.1.9 敏感性试验
2.1.10 重复性试验
2.2 结果
2.2.1 质粒标准品的制备
2.2.2 real-time PCR条件优化
2.2.3 标准曲线的制作
2.2.4 特异性试验结果
2.2.5 敏感性试验结果
2.2.6 重复性试验结果
2.3 讨论
第三章 ARV感染对鸡胚成纤维细胞6种细胞因子mRNA转录水平的影响
摘要
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒
3.1.2 主要仪器与试剂
3.1.3 细胞的制备与培养
3.1.4 病毒TCID50测定
3.1.5 病毒感染方法
3.1.6 收集细胞样品
3.1.7 细胞RNA抽提与反转录
3.1.8 样品测定
3.1.9 数据统计分析
3.2 结果
3.2.1 ARV病毒结构蛋白σ C基因的表达变化
3.2.2 IL-1β基因的表达变化
3.2.3 IL-6基因的表达变化
3.2.4 IL-17基因的表达变化
3.2.5 IL-18基因的表达变化
3.2.6 IFN-γ基因的表达变化
3.2.7 TNF-α基因的表达变化
3.2.8 不同接种剂量感染CEF细胞24h后6种细胞因子的表达变化
3.3 讨论
第四章 ARV感染对SPF鸡组织器官中6种细胞因子mRNA转录的影响
摘要
4.1 材料与方法
4.1.1 主要仪器与试剂
4.1.2 病毒
4.1.3 SPF鸡孵化
4.1.4 SPF鸡饲养管理
4.1.5 SPF鸡的人工感染试验
4.1.6 SPF鸡剖检及组织样品采集
4.1.7 组织样品RNA抽提及反转录
4.1.8 Real-time PCR对试验样品的测定
4.1.9 数据处理和统计分析
4.2 结果
4.2.1 感染后临床表现
4.2.2 关节中6种细胞因子的表达变化
4.2.3 心脏中6种细胞因子的表达变化
4.2.4 脾脏中6种细胞因子的表达变化
4.2.5 胸腺中6种细胞因子的表达变化
4.2.6 法氏囊中6种细胞因子的表达变化
4.2.7 外周血中6种细胞因子的表达变化
4.3 讨论
第五章 ARV感染对SPF鸡外周CD4+、CD8+T细胞量的影响
摘要
5.1 材料与方法
5.1.1 仪器与主要试剂
5.1.2 病毒
5.1.3 SPF鸡孵化
5.1.4 SPF鸡饲养管理
5.1.5 SPF鸡的人工感染试验
5.1.6 外周血淋巴细胞样品的制备
5.1.7 流式细胞仪检测分析样品
5.1.8 数据处理
5.2 结果
5.2.1 ARV感染后外周血中CD4+T细胞数的变化
5.2.2 ARV感染后外周血中CD8+T细胞数的变化
5.3 讨论
结论
参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间发表论文情况
本文编号：3892965
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3892965.html
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