鸡IFIT5基因的克
发布时间：2024-02-02 14:40
IFIT家族是一类主要受干扰素、病毒和脂多糖诱导表达的干扰素诱导基因。其编码的蛋白可通过抑制翻译起始,识别、结合并隐退特定类型的病毒核酸或蛋白以及参与调节细胞固有的和非固有的免疫反应等方式来抵抗病毒的入侵。然而,目前该家族基因在禽类上的研究甚少。本研究首先通过分子克隆的方法获取了鸡IFIT5基因CDS区全长序列,并对其相关分子生物信息进行了分析与预测。其次,采用qRT-PCR技术构建了鸡IFIT5基因的组织表达谱,并在机体和细胞水平上检测了鸡IFIT5基因对不同毒力新城疫病毒毒株和不同诱导刺激物的免疫应答差异。最后,在细胞水平上采用siRNA干扰和外源过表达技术初步探究了鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3对IFIT5基因的表达调控作用以及鸡IFIT5基因对IRF-3和NF-κB信号通路的影响。取得的主要结果如下：(1)鸡IFIT5基因CDS区全序列长1440bp,由两个外显子组成,共可编码479个氨基酸。其推导氨基酸序列与鸟类对应序列的相似度均不超过70%,与哺乳动物对应序列的相似度均不超过50%。(2)鸡IFIT5基因在脾、心、肺、胸腺、肾和小肠组织中具有相对较高的mRN...
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号说明
1 文献综述
1.1 IFIT家族简介
1.2 IFIT家族基因结构与表达研究进展
1.2.1 IFIT家族基因结构特征
1.2.2 IFIT家族基因表达特性
1.2.3 IFIT家族基因表达调控通路
1.3 IFIT家族蛋白结构与功能研究进展
1.3.1 IFIT家族蛋白结构特征
1.3.2 IFIT家族蛋白功能研究
1.4 IFIT5的研究进展
1.5 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物与病毒来源
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 主要试剂及耗材
2.1.4 主要分析软件及网站
2.2 试验方法
2.2.1 试验技术路线
2.2.2 SPF鸡的孵化、饲喂、攻毒和采样
2.2.3 cDNA模板的制备
2.2.4 鸡IFIT5基因CDS区的克隆与测序
2.2.5 真核表达载体的构建
2.2.6 细胞试验
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.2.8 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 鸡IFIT5基因CDS区的克隆与测序
3.2 鸡IFIT5基因CDS区序列分析
3.2.1 鸡IFIT5基因CDS区核苷酸序列分析
3.2.2 鸡IFIT5基因推导氨基酸序列分析
3.3 鸡IFIT5基因mRNA水平的组织表达谱构建
3.4 鸡IFIT5基因在机体中对不同毒力新城疫病毒的免疫应答差异
3.4.1 两攻毒组胸腺组织中IFIT5基因的表达差异
3.4.2 两攻毒组脾脏组织中IFIT5基因的表达差异
3.4.3 两攻毒组法氏囊组织中IFIT5基因的表达差异
3.5 鸡IFIT5基因在鸡胚成纤维细胞中对不同刺激物的免疫应答差异
3.5.1 Poly I：C对鸡IFIT5基因的免疫诱导作用
3.5.2 Poly dA：dT对鸡IFIT5基因的免疫诱导作用
3.5.3 新城疫病毒Mukteswar毒株对鸡IFIT5基因的免疫诱导作用
3.6 鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因对IFIT5表达水平的调控作用
3.6.1 过表达鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因对IFIT5免疫应答水平的影响
3.6.2 干扰鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因表达对IFIT5免疫应答水平的影响
3.7 鸡IFIT5蛋白的亚细胞定位
3.8 过表达鸡IFIT5基因对IRF-3和NF-κB应答基因表达水平的影响
4 讨论
4.1 鸡IFIT5基因CDS区序列分析
4.2 鸡IFIT5基因的组织表达分布特点
4.3 两攻毒组中IFIT5基因的免疫应答差异
4.4 鸡胚成纤维细胞对不同刺激物的免疫应答差异
4.5 鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3对IFIT5基因的表达调控
4.6 鸡IFIT5对IRF-3和NF-κB信号通路的影响
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
本文编号：3892829
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
主要符号说明
1 文献综述
1.1 IFIT家族简介
1.2 IFIT家族基因结构与表达研究进展
1.2.1 IFIT家族基因结构特征
1.2.2 IFIT家族基因表达特性
1.2.3 IFIT家族基因表达调控通路
1.3 IFIT家族蛋白结构与功能研究进展
1.3.1 IFIT家族蛋白结构特征
1.3.2 IFIT家族蛋白功能研究
1.4 IFIT5的研究进展
1.5 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物与病毒来源
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 主要试剂及耗材
2.1.4 主要分析软件及网站
2.2 试验方法
2.2.1 试验技术路线
2.2.2 SPF鸡的孵化、饲喂、攻毒和采样
2.2.3 cDNA模板的制备
2.2.4 鸡IFIT5基因CDS区的克隆与测序
2.2.5 真核表达载体的构建
2.2.6 细胞试验
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.2.8 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 鸡IFIT5基因CDS区的克隆与测序
3.2 鸡IFIT5基因CDS区序列分析
3.2.1 鸡IFIT5基因CDS区核苷酸序列分析
3.2.2 鸡IFIT5基因推导氨基酸序列分析
3.3 鸡IFIT5基因mRNA水平的组织表达谱构建
3.4 鸡IFIT5基因在机体中对不同毒力新城疫病毒的免疫应答差异
3.4.1 两攻毒组胸腺组织中IFIT5基因的表达差异
3.4.2 两攻毒组脾脏组织中IFIT5基因的表达差异
3.4.3 两攻毒组法氏囊组织中IFIT5基因的表达差异
3.5 鸡IFIT5基因在鸡胚成纤维细胞中对不同刺激物的免疫应答差异
3.5.1 Poly I：C对鸡IFIT5基因的免疫诱导作用
3.5.2 Poly dA：dT对鸡IFIT5基因的免疫诱导作用
3.5.3 新城疫病毒Mukteswar毒株对鸡IFIT5基因的免疫诱导作用
3.6 鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因对IFIT5表达水平的调控作用
3.6.1 过表达鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因对IFIT5免疫应答水平的影响
3.6.2 干扰鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因表达对IFIT5免疫应答水平的影响
3.7 鸡IFIT5蛋白的亚细胞定位
3.8 过表达鸡IFIT5基因对IRF-3和NF-κB应答基因表达水平的影响
4 讨论
4.1 鸡IFIT5基因CDS区序列分析
4.2 鸡IFIT5基因的组织表达分布特点
4.3 两攻毒组中IFIT5基因的免疫应答差异
4.4 鸡胚成纤维细胞对不同刺激物的免疫应答差异
4.5 鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3对IFIT5基因的表达调控
4.6 鸡IFIT5对IRF-3和NF-κB信号通路的影响
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
本文编号：3892829
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3892829.html
