PABPC4介导选择性自噬降解CoV N蛋白抑制CoVs复制的分子机制

发布时间：2024-02-03 06:48

　　猪流行性腹泻病毒是造成仔猪高发病率和高死亡率的一种肠道致病性冠状病毒,具有重要的经济意义。引起的以水样腹泻、呕吐和脱水为特征,各种年龄和不同品种的猪群都有易感性的一种急性高度接触性的猪肠道传染病。PABPC4(cytoplasmic poly(A)binding protein 4)是一种mRNA结合蛋白,在红细胞分化、端粒酶活性调节和细胞生长中起重要作用。N蛋白是RNA结合蛋白,参与转录、翻译和病毒组装。实验室前期通过质谱分析发现PABPC4与PEDV N蛋白互作。为进一步探究PABPC4对冠状病毒复制的影响,我们进行了以下研究:1.SP1调控PABPC4的表达。通过PABPC4启动子扩增、双荧光素酶试验和荧光定量PCR等试验,结果表明:SP1为PABPC4的转录因子。2.PABPC4抑制PEDV复制并通过PABPC4-MARCH8-NDP52自噬途径降解PEDV N蛋白。第一,在Vero和LLC-PK1细胞上,过表达和干扰PABPC4并感染PEDV。试验结果表明:PABPC4在Vero细胞和LLC-PK1细胞上能够抑制PEDV复制。第二,通过Co-IP、激光共聚焦和GST Pull...

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【部分图文】：

图2.1PEDV感染LLC-PK1、Vero细胞PABPC4变化量A:PEDV感染LLC-PK1细胞;B:PEDV感染Vero细胞

别收取病毒上清液，抽提RNA、反转录并通过qPCR的方法检测细胞病毒上清液中PABPC4mRNA水平表达量，试验结果显示：与对照组相比，PEDV感染后的细胞中PABPC4的含量均表现出下调，其中，32hPABPC4的含量下调较显著（图2.1A所示）；同样地，感染Vero细胞18h....

图2.2PABPC4启动子核心区域的分析

中国农业科学院硕士学位论文

图2.3PABPC4转录因子预测及分析

中国农业科学院硕士学位论文16为了进一步证明SP1调控PABPC4，我们通过双荧光素酶试验探究SP1对PABPC4启动子活性的影响。试验结果表明：SP1诱导了含有153到1核苷酸的启动子的更高的荧光素酶表达（图2.5E所示，p<0.05）。通过上述一系列试验，我们可以得出：SP1....

图2.4猪源SP1基因扩增M:DNA分子质量标准(DL5000)

中国农业科学院硕士学位论文17图2.4猪源SP1基因扩增M:DNA分子质量标准(DL5000)Fig.2.4AmplificationoftheSP1genesofPorcineM:DNAMarker(DL5000)图2.5不同转录因子调控PABPC4表达A-D:qPCR检测内源....

本文编号：3893904