氨苄青霉素免疫原性分析及其抗体制备

发布时间：2024-02-04 05:05

　　氨苄青霉素（AMP）是β-内酰胺类抗生素的一种，属于半抗原，为广谱抗生素；另外，AMP还具有促进动物生长的作用，因此在畜牧业养殖中常被用作饲料添加剂或用于动物乳腺炎等疾病的防治，从而使动物源性食品中含有超标的AMP残留，严重危害了人类健康。建立一种准确、快速、简便的氨苄青霉素残留检测方法是十分必要的。 本研究首先通过制备高质量的氨苄青霉素全抗原，免疫Balb/c小鼠，制备高亲和力、高特异性的抗AMP单克隆抗体。在此基础上，初步建立氨苄青霉素ELISA检测技术。 （1）首先采用生理学法、EDC法、戊二醛法、NHS+EDC法、BS3法和SMCC六种方法将AMP与BSA、OVA和KLH三种载体蛋白偶联，合成完全抗原。采用紫外扫描法和SDS-PAGE凝胶电泳法对偶联效果进行了鉴定。 （2）将合成的抗原开展免疫原性分析，其中③号小鼠血清效价达到了2×105，③号小鼠血清敏感性最好，其抑制率达到了86.2%。 选择③号小鼠利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，共筛选出3株杂交瘤细胞株，分别为2C3、4E5和4C7。其中2C3杂交瘤细胞分泌抗体的性质稳定，效价也较高，用其制备腹水，大量制备单抗。纯化后2C3...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1青霉素类药物分子结构

青霉素类抗生素是β-内酰胺类抗生素中最为重要的一种，因其效率高、毒性低等特点而得到广泛推广及应用。青霉素类抗生素的结构框架是由β-内酰胺环、噻唑环以及侧链构成的，侧链的分子结构变化可以形成各种不同的药物（图1.1）[1]。图1.1青霉素类药物分子结构1.1.1理化性质氨苄青霉....

图1.2氨苄青霉素分子结构

可以形成各种不同的药物（图1.1）[1]。图1.1青霉素类药物分子结构质AMP）属于青霉素类抗生素，别名氨苄西林、安必仙、安比子式：C16H19N3O4S，分子量为349.40。正常状态下呈结晶的刺激性气味；微溶于水，不溶于脂肪油或氯仿等有机溶剂。粉末状或结晶状，基本没有臭味，....

图2.1生理学法交联反应

具体方法：称取0.04g氨苄青霉素和0.025g载体蛋白BSA（OVA，0.02gKLH）溶解于5mlris-HCl（0.015mol/LpH8.8）中，然后在37℃恒温摇床中反应3h。反应完成后，将反应物装析袋中用PBS（0.005mol/LpH7.4）在4℃下透析48h，....

图2.2EDC介导的AMP与载体蛋白的偶联反应

图2.1生理学法交联反应3.2碳化二亚胺法（EDC法）理：EDC是一种零长度交联剂，即它在诱导酰胺键形成后不引入任何连接臂，在温和条氨苄青霉素上的-COOH与蛋白质上的-NH2偶联生成酰胺键。首先是EDC先与氨苄青霉-COOH反应生成一个中间产物，然后再与载体蛋白上的-N....

本文编号：3895259