TIGIT特异性单域抗体的筛

发布时间：2024-02-07 04:01

　　在肿瘤微环境中,TIGIT是表达在NK细胞,T细胞表面的一种抑制性受体,当与配体CD155,CD112结合后会引起NK细胞,T细胞耗竭,从而促进肿瘤的生长。通过研究靶向的TIGIT的单域抗体,阻断TIGIT/CD155这一信号通路会增强细胞毒性T淋巴细胞及NK细胞的抗肿瘤应答,延缓肿瘤生长,与传统的单克隆抗体相比而言,单域抗体具有分子量小,能透过血脑屏障,易于改造和重组表达等优点。将为肿瘤的诊断与治疗以及药物研发奠定坚实的基础,未来具有潜在应用前景。本试验首先克隆出TIGIT基因,并构建TIGIT表达载体,以大肠杆菌为表达系统,表达并纯化TIGIT蛋白;以TIGIT蛋白作为抗原免疫成年健康双峰驼,构建TIGIT特异性噬菌体抗体库,使用商品化、真核表达的TIGIT蛋白对构建好的抗体库进行3轮的富集、筛选,经Phage ELISA鉴定TIGIT蛋白结合特异性阳性克隆,将阳性克隆基因连接至原核表达载体pET-25b-SBP,采用低温诱导进行可溶性表达,得到可溶性的抗TIGIT特异性单域抗体,经ELISA鉴定其亲和活性。本课试验应用噬菌体展示技术成功获得了抗TIGIT的单域抗体,并在后续试验中...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３?ＴＩＧＩＴ对肿瘤免疫循环的抑制作用结构（引Ｍａｎｉｅｒｉ?ＮＡ．２０１７［２１］）??Ｆｉｇ．３?Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｃａｎｃｅｒ?Ｉｍｍｕｎｉｔｙ?Ｃｙｃｌｅ?ｂｙ?ＴＩＧＩＴ?（Ｍａｎｉｅｒｉ?ＮＡ．２０１７＾２１＾）??

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１４?ＴＩ?ＧＩＴ特异性单域抗体的筛癣制备及鉴定???（２）菌体破碎上清用１０ＭＮａＯＨ调ＰＨ＝８，为除去多余杂质，可用０．４５＾ｍｌ??滤器过滤至已平衡好的Ｎｉ－ＮＴＡ柱中，４°Ｃ过夜结合；??（３）第二天醉育结束后收集流穿液，加入１０倍体积的Ｗａｓｈｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ洗漆，....

图６?ＴＩＧＩＴ蛋白纯化结果??Ｆｉ．６?ＴＩＧＩＴｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??

?内蒙古农业大学硕士学位论文?１５??Ｍ?１?２?３?４??ＫＤａ??１２０??＿＿?■??１００?——？－?￣??７０?￣?—??５０???４０＿ｒ??ｍｍｍ??３０—??园ｒ：：?＇?．?％??２５——??图６?ＴＩＧＩＴ蛋白纯化结果??Ｆｉｇ．６?ＴＩＧＩＴ?ｐｒｏｔｅｉｎ....

本文编号：3896725