山羊PHKG1基因克隆及其表达特性分析

发布时间：2024-02-15 12:22

　　为获得山羊PHKG1基因序列,明确其生物学特征,阐明其在山羊各组织及诱导分化不同阶段皮下和肌内脂肪细胞中的表达特性,以简州大耳羊为试验动物,屠宰后采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、背最长肌、皮下脂肪等组织样品,提取组织中总RNA,利用RT-PCR方法克隆山羊PHKG1基因序列,利用各种在线工具分析其生物学特性,利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术检测其在各个组织及不同分化阶段的前体脂肪细胞中的表达水平。结果显示,克隆得到的山羊PHKG1基因序列1 233 bp,其中CDS区1 164 bp,共编码387个氨基酸,形成无信号肽的不稳定亲水酸性非跨膜蛋白,亚细胞定位显示其主要存在细胞质中;山羊PHKG1氨基酸序列与绵羊、牛、猪、马、人的相似性均在90%以上,说明该基因在不同物种中具有较高保守性;构建进化树显示,山羊和绵羊在同一分支,符合物种进化规律;组织表达谱显示,PHKG1基因在山羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、背最长肌、皮下脂肪中广泛表达,且在背最长肌中表达水平最高(P<0.01),时序表达谱显示,PHKG1基因在成脂诱导分...

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【部分图文】：

图4PHKG1蛋白系统进化树

为了研究山羊PHKG1蛋白的进化过程,用MEGA5.0构建进化树。结果(图4)显示,山羊与绵羊首先聚为一类,亲缘关系最近,因与牛同属反刍动物聚类在同一分支,与原鸡的亲缘关系最远,符合物种的进化规律。2.4山羊PHKG1基因组织表达分析

图5PHKG1基因在山羊不同组织中的相对表达水平

利用qPCR方法检测PHKG1基因在山羊各个组织中的表达水平,结果表明,PHKG1基因在所检测的7个组织中均有表达,以背最长肌中的表达最高,极显著高于其他的组织(P<0.01),在皮下脂肪、肾、心、肝、肺和脾组织表达量相对较低,组织间差异不显著(图5)。2.5山羊PHKG1基因....

图2山羊和其他物种间PHKG1氨基酸序列比对

用ExPASy在线工具对山羊PHKG1氨基酸序列进行分析,其预测蛋白分子式为C2016H3156N544O580S18,分子质量为44.87ku;在氨基酸组成中,亮氨酸(Leu)含量为9.6%,是占比最高的氨基酸残基;带正电荷(Arg+Lys)和带负电荷(Asp+Lys)的氨基....

图1山羊PHKG1基因扩增结果

以简州大耳羊背最长肌cDNA为模板,经PCR扩增获得与预期目的产物大小相符的片段(图1),测序得到PHKG1基因片段长度1233bp,其中CDS区1164bp,无5′UTR序列,3′UTR69bp,共编码387个氨基酸。2.2山羊PHKG1基因序列分析

本文编号：3899742