生产禽流感病毒的悬浮MDCK细胞稳定性的研究

发布时间：2024-02-25 12:48

　　旨为研究悬浮MDCK细胞在长期传代过程中细胞生长稳定性与病毒生产稳定性。以悬浮MDCK细胞为研究对象,通过对该细胞进行了长达200多天的传代培养,考察了传代过程中各代次细胞的生长情况以及对H9N2禽流感病毒的生产能力差异;探究了不同培养基稀释比例和MOI等工艺参数条件对长期传代的悬浮MDCK细胞生产H9N2禽流感病毒过程的影响关系;另外,从ROS水平和细胞周期两方面,研究了高低代次细胞的病毒生产能力差异的内在原因。结果显示,各代次悬浮MDCK细胞形态相似,细胞生长能力无显著性差异,表明该细胞在长期传代过程中细胞生长稳定性良好。但HA滴度随细胞代次的增加而增加,最高代次细胞(P111)的病毒滴度较最低代次细胞(P1)约高0.5 Log₂HAU/100 μL;P111细胞在不同工艺下病毒产量均高于P1细胞,表明了该细胞长期传代后病毒生产能力略有提高。最后,研究发现,与P1相比,P111胞内ROS水平较低并且G0/G1期细胞的比例较高,此现象可能是高代次细胞产量提高的原因。

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【部分图文】：

图4各代次悬浮MDCK细胞流感病毒HA滴度(A)与单细胞产毒率(B)随时间变化

图3各代次悬浮MDCK细胞批培养过程中活细胞密度(A),细胞活率(B)以及比生长速率(C)变化2.3不同生产工艺下高低代次细胞产毒情况验证

图5不同稀释比例下高低代次悬浮MDCK细胞所产流感病毒最高HA滴度(A)与最高单细胞产毒率(B)

为验证不同代次细胞产毒差异情况是否受细胞液稀释比例的影响,本实验将P1、P111细胞作为研究对象,考察高低代次细胞在不同稀释比例下的最高病毒产量(HAmax与svymax)。由图5可见,新鲜培养基比例越高,HAmax与svymax越高,说明营养物质越充足越有利于此悬浮MDCK细胞....

图1各代次悬浮MDCK细胞的形态

2.1.3不同代次细胞的批培养稳定性为考察各代次细胞在有限营养环境中的生长能力,将各代次细胞进行为期9d批培养实验,结果见图3。结果显示,在此过程中各代次细胞的活细胞密度、细胞活率、比生长速率变化趋势相似,且均在第5天达到最高活细胞密度(VCDmax),并未出现随细胞代次增加....

图2各代次悬浮MDCK细胞传代过程中活细胞密度(A),细胞直径(B)以及比生长速率(C)变化

将各代次细胞以培养基与细胞液体积比为1∶1的常规工艺稀释接毒,考察长时间传代后悬浮MDCK细胞产毒能力的变化情况。结果显示(图4),各代次细胞接种流感病毒后48hpi内HA滴度不断增加,随后趋于稳定。对比P1、P111病毒产量,24hpi与48hpi两代次存在显著性差异(P....

本文编号：3910335