小反刍兽疫及口蹄疫病毒抗原基因重组山羊痘病毒活载体疫苗的研究

发布时间：2024-02-29 18:09

　　口蹄疫（foot and mouth disease，FMD）、小反刍兽疫（peste des petits ruminants，PPR）和羊痘（capripox，CP）是危害山羊、绵羊等小型反刍动物的3种重大疫病，均为世界动物卫生组织（OIE）发布的A类烈性传染病。3种疫病的病原分别是口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV）、小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）和羊痘病毒（capripoxvirus，CPV）。目前这3类疫病的防控主要依靠灭活苗或弱毒苗，在实际应用中存在着免疫持续期短、热稳定性差、病毒毒力有返强风险等诸多缺陷。因此，需要研制更为安全高效的新型疫苗。 病毒载体是现代生物科学研究的热点之一，诸多病毒载体已成功构建，并成为研制新型疫苗的候选工具。羊痘病毒活载体就是其中之一。在上述3种感染羊的病毒中，PPRV的H蛋白和F蛋白是刺激机体产生中和抗体的主要抗原；而FMDV的P1-2A在3C的作用下可以形成病毒的核衣壳，是中和抗体产生的主要诱导物，其中P1蛋白中的VP1片段是抗原决定簇最...

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摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 小反刍兽疫疫苗研究进展
        1.1.1 PPR 简介
        1.1.2 PPR 弱毒疫苗
        1.1.3 重组标记疫苗
        1.1.4 小结与展望
    1.2 口蹄疫疫苗研究进展
        1.2.1 口蹄疫简介
        1.2.2 灭活抗原疫苗
        1.2.3 新型分子疫苗
        1.2.4 基础研究在合理设计 FMD 疫苗中的作用
    1.3 羊痘病毒研究进展
        1.3.1 羊痘简介
        1.3.2 羊痘病毒基因组研究进展
        1.3.3 羊痘疫苗研究进展
        1.3.4 羊痘病毒活载体研究进展
    1.4 本研究的目的和意义
第二章 重组转移载体的设计、构建与功能验证
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料与试剂
        2.1.2 重组质粒的设计
        2.1.3 重组质粒的构建
        2.1.4 启动子 p11 和 p7.5 功能的验证
    2.2 结果
        2.2.1 目的片段 PCR 结果
        2.2.2 重组质粒酶切鉴定结果
        2.2.3 重组质粒测序结果
        2.2.4 转染 LT 细胞结果
    2.3 讨论
        2.3.1 同源臂的设计
        2.3.2 载体设计与构建策略
        2.3.3 启动子功能的验证
第三章 重组山羊痘病毒的产生与纯化
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料与试剂
        3.1.2 重组质粒的制备
        3.1.3 GPV 基因组 DNA 的提取
        3.1.4 重组质粒与 GPV 共转染 LT 细胞
        3.1.5 重组 GPV（rGPV）的筛选与纯化
    3.2 结果
        3.2.1 重组质粒转染 LT 细胞的结果
        3.2.2 重组 GPV 的筛选结果
        3.2.3 重组 GPV 的纯化结果
    3.3 讨论
        3.3.1 同源重组的基本过程
        3.3.2 痘病毒基因组 DNA 的复制
        3.3.3 提高同源重组的效率
        3.3.4 重组 GPV 的筛选策略
        3.3.5 重组 GPV 的纯化
第四章 重组山羊痘病毒外源基因的鉴定
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料与试剂
        4.1.2 RT-PCR 检测 rGPV 外源基因的转录
        4.1.3 rGPV 中外源基因表达产物的检测
    4.2 结果
        4.2.1 rGPV 中外源基因 RT-PCR 结果
        4.2.2 rGPV 中外源基因的表达结果
    4.3 讨论
        4.3.1 病毒基因转录的特点
        4.3.2 痘病毒基因转录的主要元件和转录后加工
        4.3.3 病毒蛋白的翻译及其翻译后加工
        4.3.4 rGPV 中外源基因的转录和翻译
第五章 rGPV 的免疫效果测定
    5.1 材料与方法
        5.1.1 试剂及疫苗制备
        5.1.2 动物分组及免疫程序
        5.1.3 抗体水平及效价测定
        5.1.4 数据统计及分析
    5.2 结果
        5.2.1 rGPV 病毒滴度
        5.2.2 抗体水平与效价
    5.3 讨论
        5.3.1 痘病毒感染的免疫反应
        5.3.2 抗体水平的变化
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3914729