CXCR1/2在猪肺炎中的表达分析及其拮抗蛋白的制备
发布时间：2024-02-29 22:30
医学研究表明CXCR1和CXCR2(CXCR1/2)及其配体CXCL8在多种疾病中发挥重要的调节作用。为分析猪CXCR1/2在肺炎中的表达,研发新型兽用抗炎药,本研究表达了猪CXCR1/2蛋白,制备了多克隆抗体,通过荧光定量PCR(q PCR)和免疫组织化学技术(IHC)分析了猪CXCR1/2在间质性肺炎、支气管肺炎、化脓性肺炎、纤维素性肺炎和浆液性肺炎中的表达情况,并在此基础上表达了猪CXCR1/2拮抗蛋白CXCL8(3-72)N11R/G31P(p N11R)和CXCL8(3-72)G31P(p G31P),通过细胞趋化实验和动物实验评价了它们的抑炎效果,拟为研发新型兽用抗炎药提供科学依据,主要研究内容如下:1样品收集2017年3月至2018年12月共收集猪肺炎样品136例,包含间质性肺炎81例,支气管肺炎17例,化脓性肺炎21例,浆液性肺炎8例,纤维素性肺炎9例。2猪不同类型肺炎中CXCR1/CXCR2 m RNA的表达分析通过q PCR方法检测不同肺炎组织中CXCR1和CXCR2的表达量。结果显示:与正常肺组织相比,5种类型肺炎样本中肺组织CXCR1/2 m RNA的表达量均极...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词(Abbreviation)
1 文献综述
1.1 CXCL8 的基因结构、表达与调节
1.2 CXCR1/2 的基因结构、表达与调节
1.3 CXCR1/2与CXCL8 的作用机理
1.4 CXCR1/2与CXCL8 在疾病中的调节作用
1.5 CXCR1/2 拮抗剂研究进展
1.6 猪CXCR1/2与CXCL8 研究进展
1.7 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 样品收集
2.1.2 质粒与菌株
2.1.3 实验动物
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 主要试剂
2.1.6 主要试剂配制
2.2 试验方法
2.2.1 肺炎的病理学诊断及分类
2.2.2 猪CXCR1/2 mRNA在不同类型肺炎样本中的表达分析
2.2.2.1 引物设计
2.2.2.2 猪肺组织总RNA提取
2.2.2.3 cDNA的合成
2.2.2.4 qPCR检测CXCR1/2 mRNA的表达
2.2.3 猪CXCR1/2 重组质粒的构建
2.2.3.1 猪CXCR1/2 基因的扩增
2.2.3.2 PCR产物的回收
2.2.3.3 目的片段与质粒的酶切、连接与转化
2.2.3.4 阳性质粒的筛选
2.2.4 猪CXCR1/2 重组蛋白的表达、纯化与鉴定
2.2.4.1 重组蛋白的预表达
2.2.4.2 重组蛋白的大量表达与纯化
2.2.4.3 BCA法测定蛋白浓度
2.2.4.4 重组蛋白的Western-blot鉴定
2.2.5 鼠抗猪CXCR1/2 多克隆抗体的制备
2.2.5.1 小鼠免疫
2.2.5.2 多克隆抗体的纯化
2.2.5.3 多克隆抗体间接ELISA检测
2.2.5.4 多克隆抗体Western-blot检测
2.2.6 CXCR1/2 在不同类型肺炎组织中的表达与分布
2.2.6.1 免疫组织化学染色
2.2.6.2 IHC阳性率分析
2.2.7 猪CXCR1/2 拮抗蛋白重组质粒的构建
2.2.7.1 基因扩增
2.2.7.2 PCR产物的回收
2.2.7.3 目的片段与质粒的酶切、连接与转化
2.2.7.4 阳性质粒的筛选
2.2.8 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的表达、纯化与验证
2.2.8.1 重组蛋白的预表达
2.2.8.2 重组蛋白的大量表达与纯化
2.2.8.3 重组蛋白的Western-blot鉴定
2.2.9 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞迁移的影响
2.2.9.1 猪外周血中性粒细胞的分离
2.2.9.2 中性粒细胞活性鉴定
2.2.9.3 中性粒细胞纯度的鉴定
2.2.9.4 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞迁移的影响
2.2.10 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对LPS诱导的小鼠肺炎的治疗作用
2.2.10.1动物实验
2.2.10.2 肺组织病理学观察
2.2.10.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞计数
2.2.10.4 肺组织MPO检测
2.2.10.5 炎症因子检测
3 试验结果
3.1 样品收集
3.2 猪CXCR1/2 mRNA在不同类型肺炎样品中的表达分析
3.3 猪CXCR1/2 重组蛋白的表达与多克隆抗体的制备
3.3.1 PCXCR1/2 重组质粒的构建
3.3.2 猪CXCR1/2 重组蛋白的表达与纯化
3.3.3 鼠抗猪CXCR1/2 多克隆抗体的制备
3.3.3.1 多克隆抗体间接ELISA检测
3.3.3.2 多克隆抗体Western-blot验证
3.4 猪CXCR1/2 在肺炎组织中的表达与分布
3.5 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的制备
3.5.1 重组质粒的构建
3.5.2 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的表达与纯化
3.6 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞迁移的影响
3.6.1 中性粒细胞活性和纯度鉴定
3.6.2 CXCR1/2 拮抗蛋白对中性细胞定向迁移的影响
3.7 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对LPS诱导的小鼠肺炎的治疗作用
3.7.1 肺组织病理学观察
3.7.2 BALF中性粒细胞计数
3.7.3 肺组织MPO检测
3.7.4 肺组织炎症因子检测
4 讨论
4.1 猪肺炎的流行特点
4.2 猪CXCR1/2 蛋白的原核表达
4.3 猪CXCR1/2 在肺炎组织中的表达与分布
4.4 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的表达
4.5 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞趋化的影响
4.6 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对LPS诱导的小鼠肺炎的治疗作用
5 结论
参考文献
致谢
本文编号：3915027
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词(Abbreviation)
1 文献综述
1.1 CXCL8 的基因结构、表达与调节
1.2 CXCR1/2 的基因结构、表达与调节
1.3 CXCR1/2与CXCL8 的作用机理
1.4 CXCR1/2与CXCL8 在疾病中的调节作用
1.5 CXCR1/2 拮抗剂研究进展
1.6 猪CXCR1/2与CXCL8 研究进展
1.7 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 样品收集
2.1.2 质粒与菌株
2.1.3 实验动物
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 主要试剂
2.1.6 主要试剂配制
2.2 试验方法
2.2.1 肺炎的病理学诊断及分类
2.2.2 猪CXCR1/2 mRNA在不同类型肺炎样本中的表达分析
2.2.2.1 引物设计
2.2.2.2 猪肺组织总RNA提取
2.2.2.3 cDNA的合成
2.2.2.4 qPCR检测CXCR1/2 mRNA的表达
2.2.3 猪CXCR1/2 重组质粒的构建
2.2.3.1 猪CXCR1/2 基因的扩增
2.2.3.2 PCR产物的回收
2.2.3.3 目的片段与质粒的酶切、连接与转化
2.2.3.4 阳性质粒的筛选
2.2.4 猪CXCR1/2 重组蛋白的表达、纯化与鉴定
2.2.4.1 重组蛋白的预表达
2.2.4.2 重组蛋白的大量表达与纯化
2.2.4.3 BCA法测定蛋白浓度
2.2.4.4 重组蛋白的Western-blot鉴定
2.2.5 鼠抗猪CXCR1/2 多克隆抗体的制备
2.2.5.1 小鼠免疫
2.2.5.2 多克隆抗体的纯化
2.2.5.3 多克隆抗体间接ELISA检测
2.2.5.4 多克隆抗体Western-blot检测
2.2.6 CXCR1/2 在不同类型肺炎组织中的表达与分布
2.2.6.1 免疫组织化学染色
2.2.6.2 IHC阳性率分析
2.2.7 猪CXCR1/2 拮抗蛋白重组质粒的构建
2.2.7.1 基因扩增
2.2.7.2 PCR产物的回收
2.2.7.3 目的片段与质粒的酶切、连接与转化
2.2.7.4 阳性质粒的筛选
2.2.8 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的表达、纯化与验证
2.2.8.1 重组蛋白的预表达
2.2.8.2 重组蛋白的大量表达与纯化
2.2.8.3 重组蛋白的Western-blot鉴定
2.2.9 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞迁移的影响
2.2.9.1 猪外周血中性粒细胞的分离
2.2.9.2 中性粒细胞活性鉴定
2.2.9.3 中性粒细胞纯度的鉴定
2.2.9.4 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞迁移的影响
2.2.10 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对LPS诱导的小鼠肺炎的治疗作用
2.2.10.1动物实验
2.2.10.2 肺组织病理学观察
2.2.10.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞计数
2.2.10.4 肺组织MPO检测
2.2.10.5 炎症因子检测
3 试验结果
3.1 样品收集
3.2 猪CXCR1/2 mRNA在不同类型肺炎样品中的表达分析
3.3 猪CXCR1/2 重组蛋白的表达与多克隆抗体的制备
3.3.1 PCXCR1/2 重组质粒的构建
3.3.2 猪CXCR1/2 重组蛋白的表达与纯化
3.3.3 鼠抗猪CXCR1/2 多克隆抗体的制备
3.3.3.1 多克隆抗体间接ELISA检测
3.3.3.2 多克隆抗体Western-blot验证
3.4 猪CXCR1/2 在肺炎组织中的表达与分布
3.5 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的制备
3.5.1 重组质粒的构建
3.5.2 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的表达与纯化
3.6 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞迁移的影响
3.6.1 中性粒细胞活性和纯度鉴定
3.6.2 CXCR1/2 拮抗蛋白对中性细胞定向迁移的影响
3.7 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对LPS诱导的小鼠肺炎的治疗作用
3.7.1 肺组织病理学观察
3.7.2 BALF中性粒细胞计数
3.7.3 肺组织MPO检测
3.7.4 肺组织炎症因子检测
4 讨论
4.1 猪肺炎的流行特点
4.2 猪CXCR1/2 蛋白的原核表达
4.3 猪CXCR1/2 在肺炎组织中的表达与分布
4.4 猪CXCR1/2 拮抗蛋白的表达
4.5 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对中性粒细胞趋化的影响
4.6 猪CXCR1/2 拮抗蛋白对LPS诱导的小鼠肺炎的治疗作用
5 结论
参考文献
致谢
本文编号：3915027
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