坦布苏病毒感染细胞源外泌体的提取鉴定及特性研究

发布时间：2024-03-01 22:39

　　坦布苏病毒(Tembusu Virus,TMUV)是一种新型黄病毒,于2010年在我国首次爆发。其传播迅速,可感染蛋鸭、种鸭和鹅等多种水禽,发病禽场的感染率常高达100%。目前,TMUV感染已成为危害我国水禽养殖业的主要疾病之一。外泌体是一种由细胞产生的膜性囊泡,在机体多种生理病理过程中发挥着物质运输和信息传递的作用。某些病毒感染细胞源外泌体中包含病毒核酸及蛋白等成分,能介导细胞感染,协助病毒进行免疫逃逸,在病毒感染过程中发挥重要作用。而目前对TMUV感染细胞源外泌体特性尚不清楚。本研究对TMUV感染细胞源外泌体的提取方案进行了优化,具体从细胞选取、维持时间确立和提取方法确立三个方面展开。研究对比了三种TMUV研究常用的细胞:HEK293细胞、C6/36细胞和DEF细胞接毒后的外泌体生成量,BCA蛋白浓度测定结果显示,HEK293细胞上清中提取的外泌体蛋白浓度最高,因此选用HEK293细胞作为外泌体制备用细胞。对细胞接毒后维持36 h和48 h的上清中外泌体进行比较,BCA蛋白浓度测定结果显示,维持48 h的细胞上清中外泌体的蛋白含量仅略高于维持36 h的细胞上清中外泌体蛋白含量,因此...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1外泌体提取流程

3000g离心10min，收集管底部液体，于-80℃保存备用。具体流程见图1B。3)超滤离心结合试剂盒沉淀法：将处理好的上清分装至NMWL为100kDa的超滤离心管过滤装置中，配平后以4℃，3500g离心10min。离心结束后加入PBS重悬，后再次....

图2细胞病变及IFA检测结果

浮和死亡等病变，IFA检测显示细胞质发出绿色荧光（图2），表明病毒具有感染C6/36细胞的能力。

图3TMUVPCR扩增结果

图3TMUVPCR扩增结果A：细胞上清；B：阳性对照igure3PCRamplificationresultsofTMUVA:Supernatant;B:Positivecontrol结果表7，通过Reed-Muench法表7病毒TCID5....

图4不同细胞产生外泌体蛋白含量测定Figure4Determinationoftheproteinconcentrationofdifferentcells-derivedexosomes

布苏病毒感染细胞源外泌体的提取鉴定及特性研优化结果EF细胞，HEK293细胞和C6/36细每个样品重复提取且测定三次。结果外泌体的蛋白量显著高于C6/36细K293细胞的外泌体产量最高，因此。

本文编号：3915928