猫白介素18基因的克

发布时间：2024-03-01 21:39

　　白介素18(IL-18)可以诱导IFN-γ分泌,促进T、B淋巴细胞的增殖分化,具有良好的抗病毒活性。为探究猫IL-18的生物学活性,本研究采用水泡性口炎病毒(VSV)联合poly I:C共同刺激实验猫,采用常规方法分离猫脾淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR方法获得大小为579 bp的猫IL-18基因。构建了可溶性表达猫IL-18的重组大肠杆菌pCold-IL-18/BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析结果显示,重组菌表达了约70 ku的重组蛋白。重组蛋白经3C蛋白酶处理后并通过Ni柱亲和纯化,获得了可溶性表达的重组猫IL-18(rIL-18)。取BALB/c小鼠和猫的脾淋巴细胞,经不同浓度rIL-18刺激,采用MTT法检测rIL-18促进淋巴细胞增殖活性,结果显示可溶性表达的rIL-18能够有效地促进淋巴细胞增殖;采用细胞病变抑制法检测rIL-18协同干扰素的抗病毒效果,结果显示rIL-18联合临床用干扰素可显著增强抗病毒效果。本研究为治疗猫病毒性疾病奠定了物质基础。

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【部分图文】：

图1猫IL-18基因的RT-PCR扩增结果

重组菌pCold-IL-18/BL21经IPTG诱导，超声裂解菌体后经SDS-PAGE检测，结果显示，在约70ku处表达出目的蛋白（图3A）。采用His标签蛋白Ni柱亲和纯化重组蛋白，将纯化的重组蛋白进一步经3C蛋白酶处理后，再次利用His标签蛋白Ni柱亲和纯化，获得目的蛋白猫....

图2重组质粒pCold-IL-18的双酶切鉴定结果

图1猫IL-18基因的RT-PCR扩增结果图3rIL-18蛋白诱导表达及纯化的SDS-PAGE结果

图3rIL-18蛋白诱导表达及纯化的SDS-PAGE结果

图2重组质粒pCold-IL-18的双酶切鉴定结果2.3猫rIL-18促脾淋巴细胞增殖活性检测结果分

图4猫rIL-18促脾淋巴细胞增殖活性的检测结果

离BALB/c鼠和猫脾淋巴细胞，经细胞计数后，分别经不同浓度的rIL-18刺激，采用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况。结果显示，猫rIL-18能够促进BALB/c小鼠和猫脾淋巴细胞增殖，当浓度为50μg/mL时促淋巴细胞增殖活性最强（图4），表明可溶性表达的猫rIL-18具有促....

本文编号：3915864