猪MUC4和MUC13基因作为大肠杆菌抗性遗传标记的可行性分析

发布时间：2024-03-02 08:16

　　粘蛋白(mucins),又称上皮粘蛋白,是组织上皮细胞产生的,由膜结合和分泌型糖蛋白所组成的大分子蛋白家族。它在润滑、保护表皮细胞以及调节细胞信号转导等方面发挥着重要的作用。MUC4和MUC13蛋白作为粘蛋白家族的主要成员,在机体抗产肠毒素性大肠杆菌感染的过程中发挥着重要的作用。已有相关研究表明,MUC4和MUC13基因是ETEC F4抗性重要的候选基因,MUC4基因第17内含子243位点和MUC13基因第2内含子插入缺失突变已被作为仔猪F4大肠杆菌抗性潜在的重要遗传标记。本研究一方面以大白猪为素材,从DNA、mRNA水平,分析MUC4和MUC13基因的多态性与mRNA的表达、机体细胞因子水平、生产性状及繁殖性能的关系,在系统分析MUC4和MUC13基因突变遗传效应的基础上评估其作为抗性遗传标记用于分子选育的可行性。另一方面以课题组前期建立的苏太猪和梅山猪F18大肠杆菌抗性型和易感型群体为素材,从mRNA水平,分析MUC4及MUC13基因在35日龄苏太猪和梅山猪断奶仔猪F18抗性与敏感型个体间的表达差异及其时空表达规律,探讨MUC4及MUC13基因在作为ETEC F4抗性基因的同时,能...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
    1. 仔猪腹泻对养猪业的影响
    2. 主要产肠毒素性大肠杆菌病的致病机理
    3. MUC4及MUC13基因的研究进展
    4. 一般抗病力的评价指标
    5. 苏太猪产肠毒素性大肠杆菌F18抗性与敏感型个体的筛选
    6. 梅山猪产肠毒素性大肠杆菌F18抗性与敏感型资源群体的制备
    7. 本研究的目的及意义
第二章 猪MUC4基因第17内含子243位点的遗传效应分析
    1. 试验材料
        1.1 试验动物
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂的配制
    2. 试验方法
        2.1 基因多态性分析
            2.1.1 DNA提取方法
            2.1.2 引物设计
            2.1.3 PCR扩增
            2.1.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物
            2.1.5 酶切反应体系
            2.1.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳
            2.1.7 PCR产物测序
        2.2 基因表达分析
            2.2.1 提取RNA的前期准备工作
            2.2.2 采用Trizol法提取组织总RNA
            2.2.3 RNA甲醛变性电泳检测
            2.2.4 总RNA反转录为cDNA
            2.2.5 目的基因和内参基因引物PCR检测
            2.2.6 实时荧光定量PCR
        2.3 细胞因子的测定
            2.3.1 样本的采集与血清的分离
            2.3.2 操作流程
        2.4 生产性状及繁殖性能的测定
        2.5 统计分析
    3. 结果与分析
        3.1 PCR引物的扩增效果检测
        3.2 MUC4基因第17内含子多态性PCR-RFLP分析
        3.3 序列分析结果
        3.4 大白猪MUC4基因第17内含子基因型及等位基因频率分析
        3.5 大白猪MUC4基因第17内含子多态性与部分细胞因子水平的关联分析
        3.6 大白猪MUC4基因第17内含子多态性与生产性状以及不同胎次繁殖性能的关系
        3.7 总RNA纯度与完整性
        3.8 实时荧光定量引物常规PCR检测结果
        3.9 实时荧光定量PCR的溶解曲线
        3.10 大白猪MUC4基因第17内含子A243G位点3种基因型个体间的表达规律
        3.11 苏太猪MUC4基因不同发育时期个体间的表达分析
        3.12 苏太猪抗性与敏感型个体间MUC4基因的表达分析
        3.13 梅山猪抗性与敏感型个体间MUC4基因的表达分析
    4. 讨论
第三章 猪MUC13基因第2内含子插入突变的遗传效应分析
    1. 试验材料
    2. 试验方法
        2.1 引物设计
        2.2 PCR扩增
    3. 结果与分析
        3.1 PCR产物直接电泳分析
        3.2 大白猪MUC13基因第2内含子基因型及等位基因频率分析
        3.3 大白猪MUC13基因第2内含子多态性与免疫指标的关系
        3.4 大白猪MUC13基因第2内含子多态性与生产性状以及不同胎次繁殖性能的关系
        3.5 总RNA纯度与完整性
        3.6 实时荧光定量引物常规PCR检测结果
        3.7 实时荧光定量PCR的溶解曲线
        3.8 大白猪MUC13第2内含子插入缺失突变3种基因型个体间的表达规律
        3.9 苏太猪MUC13基因不同发育时期不同组织的表达分析
        3.10 苏太猪抗性与敏感型个体间MUC13基因的表达分析
        3.11 梅山猪抗性与敏感型个体间MUC13基因的表达分析
    4. 讨论
全文结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表学术论文



本文编号：3916584