牛源大肠杆菌ERIC-PCR分型方法的建立及K99-987P-F41融合蛋白免疫效果评价

发布时间：2024-03-07 04:22

　　本试验采用大肠杆菌肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)方法对从黑龙江省各养殖场分离的牛源大肠杆菌进行基因分析,建立基因分型方法。同时,扩增ETEC的三种菌毛K99、F41和987P基因,构建K99-987P-F41融合表达载体,以纯化的K99-987P-F41重组蛋白免疫小鼠,并对其免疫效果进行评价。查阅文献设计合成ERIC引物,通过反应条件优化,建立起ERIC-PCR检测犊牛腹泻大肠杆菌方法。应用该方法对临床分离的产肠毒素性大肠杆菌菌株进行基因分型。结果表明,ERIC-PCR检测临床分离的大肠杆菌可扩增出2¹0条带,可以分为17个基因型,其中以D型菌株最多。根据GenBank上已发表的ETEC三种菌毛K99、987P、F41基因序列,设计合成引物,经PCR扩增,将三段目的基因融合亚克隆至大肠杆菌原核表达载体pET30a(+)。经鉴定的阳性质粒K99-987P-F41转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导融合表达60 Ku左右的蛋白,蛋白大小与理论值相符合。Western Blot检测结果表明,该蛋白具有良好的免疫活性。本试验利用常规方法...

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图2-1大肠杆菌分离与镜检结果

图2-1大肠杆菌分离与镜检结果A.伊红美蓝培养基金属光泽菌落；B.革兰氏染色阴性Fig.2-1IsolationandidentificationofE.colistrainsresultsethylenebluemediumgrowthwith....

图2-2大肠杆菌毒力因子多重PCR检测结果

图2-2大肠杆菌毒力因子多重PCR检M.100bpDNAladdermarker；1~36.多重Fig.2-2E.colivirulencefactorsbymultiplexM.100bpDNAladdermarker；1~36.m....

图2-3ERIC-PCR扩增优化结果

图2-2大肠杆菌毒力因子多重PCR检测M.100bpDNAladdermarker；1~36.多重PCFig.2-2E.colivirulencefactorsbymultiplexPCM.100bpDNAladdermarker；....

图2-4部分菌株ERIC-PCR扩增结果

株产肠毒素大肠杆菌样品进行基因分型。扩增产物经琼脂物大小在100bp~3000bp之间，扩增条带数为2~10条结果一致。ERIC-PCR大肠杆菌菌株的聚类分析分布在性。每个聚类内部和聚类群之间的菌株的遗传距离相同一定程度的相似性。同时也出现了遗传关系较远、基因IC....

本文编号：3921380