羊口疮病毒重庆分离株008基因的原核表达及生物信息学分析

发布时间：2024-03-07 04:45

　　【目的】研究羊口疮病毒008蛋白的功能,用原核表达系统表达008基因,并对其进行生物信息学分析。【方法】通过重庆临床分离株扩增得到008基因片段,将其连接到pET-28a(+)载体上,构建重组表达质粒,诱导表达该蛋白;对008蛋白利用ProtScale程序分析疏水性,TMHMM server v.2.0分析跨膜区,SignalP 5.0 server预测信号肽以及通过Protean进行B细胞抗原表位预测分析。【结果】羊口疮008基因可以在E.coli中表达,重组蛋白分子量大小约为56 kd,主要以包涵体形式表达且与阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性。生物信息学研究显示,008蛋白属于疏水性蛋白,无跨膜区及信号肽区域,其中B细胞表位可能存在11个。【结论】构建的pET-28a(+)-008质粒在IPTG诱导下成功表达008蛋白,008蛋白具有良好的抗原性。

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【部分图文】：

图1羊口疮病毒重庆分离株008基因的扩增

将pET-28a(+)质粒与pMD19-T-008质粒用NdeI、HindIII双酶切后连接转化置大肠杆菌BL21(DE3)中,构建得到重组表达质粒pET-28a(+)-008,挑取阳性单克隆进行PCR以及双酶切鉴定,得到1500bp左右片段(图2),测序比对结果正确,结果表....

图2pET-28a(+)-008质粒双酶切鉴定

图1羊口疮病毒重庆分离株008基因的扩增2.3重组菌的诱导表达及SDS-PAGE分析

图3008蛋白8、16h诱导表达SDS-PAGE结果

取重组诱导菌不同诱导时间的菌体分别进行SDS-PAGE分析,试验确定IPTG诱导16h表达量最大,表达产物约为56kd,与预期蛋白条带相符,而未诱导菌和诱导后的空载体均未出现次蛋白条带(图3、图4)。对超声裂解细菌的上清和沉淀进行SDS-PAGE分析,表明重组蛋白以包涵体的形....

图8008蛋白综合预测结果

图7SignalP对008蛋白的信号肽预测3讨论

本文编号：3921407