不同粪菌悬液处理方式对猪粪菌移植过程中细菌活性及活菌组成的影响

发布时间：2024-03-09 12:15

　　旨在探究不同粪菌液处理方法对其菌群活性及存活菌群物种组成的影响,为猪粪菌移植(FMT)的优化应用提供参考。本研究共设置7个试验组制备粪菌液:静置制备新鲜粪菌液组(FS)、静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组(FFS)、离心制备新鲜粪菌液组(FC)、离心制备粪菌液于-80℃冷冻1周组(FFC)、液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组(NS)、甘油+液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组(GNS)和液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组(NFS),在37℃厌氧培养箱中平板培养48 h后,进行菌落计数。从FS、 FFS、FC和FFC 4组中根据菌落形态随机挑取87个单菌落纯化后进行16S rRNA基因全长测序。结果表明,静置和离心两种方法制备新鲜粪菌液时,粪菌活性存在显著差异,离心组显著低于静置组(P<0.05)。但冷冻粪便使用静置和离心两种方法制备的菌悬液,其粪菌活性无显著差异(P>0.05)。无论是静置还是离心方法制备粪菌液,新鲜和冷冻两种不同处理方式下的粪菌活性均无显著差异(P>0.05),且对活菌的组成也无显著影响。使用静置法制备粪菌液时,FS、NS、GN...

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【部分图文】：

图1粪菌液稀释梯度的制备及涂布

取“1.2”中所获得的上层菌悬液于无菌生理盐水中,依次稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6,如图1所示,取10-4、10-5、10-6这3个稀释梯度,进行涂布,每个梯度2～3个重复。提前制备哥伦比亚血琼脂培养基(ELITE-MEDIA,艾礼生物科技有限....

图2不同粪菌悬液处理方法对分离培养得到的菌落数目影响

采集新鲜粪便样品后,有时并不能立即制备粪菌悬液并完成粪菌移植。试验采用添加和不添加甘油两种处理方式研究冷冻保存样品对分离培养的菌落数量的影响。其一是采集新鲜粪便后,立即用液氮冷冻24h,然后采用静置的方法制备粪菌悬液(NS组);其二将采集的新鲜粪便放入10%甘油中,混匀后随即快....

图3不同处理方式对粪菌悬液中存活菌群组成的影响

本研究还比较了新鲜粪菌悬液与-80℃超低温冷冻保存1周悬液培养得到的菌落数,在多次重复试验中均发现粪菌活性无显著差异,且在粪菌组成上也没明显差异,尽管存在少数菌的缺失,这与随机挑选的菌株数目也有关系。在人类医学领域,虽然利用新鲜粪菌治疗IBD的疗效优于冷冻粪菌[22],但也有研....

本文编号：3923407