鸡胚盲肠上皮细胞传代条件的筛选与优化

发布时间：2024-03-10 02:20

　　研究目的:鸡盲肠上皮细胞是柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的宿主细胞,通过探索和优化鸡胚盲肠上皮细胞传代条件,以期建立鸡胚盲肠上皮细胞系为E.tenella对机体的损伤机制及抗球虫药的研究提供体外细胞模型。材料与方法:本试验通过对鸡胚盲肠上皮原代细胞分离消化酶的筛选、不同日龄鸡胚的选择、传代消化酶和营养因素的筛选,对连续传10以内代的细胞采用MTT法测定细胞活力,运用免疫组化染色、光镜、电镜及染色体核型分析等方法鉴定培养盲肠上皮细胞的纯度和特性。结果:(1)嗜热菌蛋白酶组(T组)、I型胶原酶(C组)、I型胶原酶+透明质酸酶组(H组)的鸡胚盲肠上皮第三代细胞增殖率依次降低;T组细胞贴壁率除第1天外其他时间段均极显著(P<0.01)高于C组、H组;细胞活力第1天至5天极显著(P<0.01)高于C组,各时间段均极显著(P<0.01)高于H组。(2)14日龄鸡胚(T14组)、15日龄鸡胚(T15组)、16日龄鸡胚(T16组)、17日龄鸡胚(T17组)盲肠上皮细胞增殖率依次为由高到低;T14组与T15组细胞贴壁率除第2天和8天外其他不同时间段均显著高于(P<0.05)...

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【部分图文】：

图３－１不同传代消化酶对传代细胞贴壁率影响??

代盲肠上皮细胞接种后有大量细胞贴壁附着并开始增殖；使用０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ??先处理细胞３０ｓ后弃去再加入０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ?（Ｔ５组）处理ｌｍｉｎ?２０ｓ得到的细??胞结果同Ｔ４组，但贴壁率和增殖率极显著（Ｐ＜０．０１）低于Ｔ４组，详见表７、图３－....

图３－２不同传代消化酶对其代细胞贴壁率影响??－

代盲肠上皮细胞接种后有大量细胞贴壁附着并开始增殖；使用０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ??先处理细胞３０ｓ后弃去再加入０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ?（Ｔ５组）处理ｌｍｉｎ?２０ｓ得到的细??胞结果同Ｔ４组，但贴壁率和增殖率极显著（Ｐ＜０．０１）低于Ｔ４组，详见表７、图３－....

图５－３培养６０ｈ的原代鸡胚盲肠上皮细胞呈铺路石?

５．１形态学观察??培养６０ｈ的原代鸡胚盲肠上皮细胞大多数呈多角形或短梭形，细胞核呈圆形或椭圆形，一??般有２＾４枚核仁（图５－１、图５－２）。细胞之间紧密相连，连接成片，呈“铺路石”样（图５－３、??图５－４），多数细胞呈岛屿状聚集（图５－５），部分细胞散在分布（图５－６）。?....

图５－４培养６０ｈ的原代鸡胚盲肠上皮细胞呈铺路石??样生长?样生长，ＨＥ??－－＊

５．１形态学观察??培养６０ｈ的原代鸡胚盲肠上皮细胞大多数呈多角形或短梭形，细胞核呈圆形或椭圆形，一??般有２＾４枚核仁（图５－１、图５－２）。细胞之间紧密相连，连接成片，呈“铺路石”样（图５－３、??图５－４），多数细胞呈岛屿状聚集（图５－５），部分细胞散在分布（图５－６）。?....

本文编号：3924092