基因Ⅶ型NDV弱毒株感染性克隆的构建及病毒拯救

发布时间：2024-03-16 16:02

　　新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类的一种高度接触性、急性、烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的传染病,我国将其列为一类动物疫病。NDV只有单一血清型,但存在多种基因型,目前我国主要流行的是Class Ⅱ类型中基因Ⅶ毒株,常规疫苗株B1、Clone30、La Sota及V4疫苗株属于基因Ⅰ型和Ⅱ型,不能有效防控基因Ⅶ型毒株。因此,应迫切研发与当前流行株基因型一致的新型疫苗。基于此,本研究对一株NDVHB株进行了全基因组测序,以此为基础建立了HB株的反向遗传操作平台,并对其F蛋白进行改造,旨在为研发基因Ⅶ型NDV弱毒疫苗提供科学依据。从河北省某发病鸡场的临床样本中检测到一株新城疫病毒,命名为HB,采用RT-PCR方法对HB株的全基因组序列进行分段扩增,并对其基因序列进行结构特性分析及同源进化分析。结果表明HB株基因组全长为15192 bp,基因组3’端存在长为55 nt的引导序列,5’端存在长为114 nt的尾随序列,主要编码的6种结构蛋白,包括基质蛋白(M)、融合蛋白(F...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图４辅助质粒构建示意图??

同源序列；通??过別〇?Ｉ和１双酶切ｐＣＩ－ｎｅｏ载体，然后利用同源重组技术将ＮＰ蛋白、Ｐ蛋白分别连接至??真核表达载体ｐＣ丨－ｎｅｏ中，因为Ｌ基因的ＯＲＦ长约６．７?ｋｂ，因此采用分段克隆方式，将Ｌ基因??分为２段扩增，分别命名为Ｌｌ、Ｌ２，再利用同源重组技术与ｐＣＩ－ｎｅｏ进....

图３?ｐＣＩ－ｎｅｏ载体示意图??Ｆｉｇ３?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｐＣＩ－ｎｅｏ?ｖｅｃｔｏｒ??

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图５?ＰＯＫ１２载体改造策略??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｓｔｒａｔｅｇｙ?ｏｆ?ｍｏｄｉｆｙ?Ｐ０ＫＩ２?ｖｅｃｔｏｒ??

ＡＡＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＣＡＡＣＡＴ?丁?ＧＣ－３’?３３３４??Ｌ２－Ｆ?５，－ＴＴＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＴＴＣＴＴＡＴＣＣＡＡＴＡＧＡＴＣＣＡＡＣＣＡＣＣＣ－３，??３４２９??Ｌ２－Ｒ?５，－ＣＡＴＧＴＣＴＧＣＴＣＧＡＡＧＣＧＧＣＣＴＴＴＴＴＴＣＴＡＡＴＣＴＧ....

图６内部基因构建策略??Ｆｉｇ．６?Ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｓｔｒａｔｅ＾?Ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｇｅｎｅ??

进行测序，将测序正确的中间质粒保存备用。??２．２．６内部基因的构建??将内部基因（ＮＰ、Ｐ和Ｌ基因）分为Ｆ３、Ｆ４和Ｆ５片段，在Ｈ片段的５’端通过引物引入??Ｔ７启动子核苷酸序列和与载体连接的同源序列，３’端引入Ｆ４片段的同源序列；在？４片段的５＇??端引入Ｆ５片段的同源序列，....

本文编号：3929775