鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2024-03-22 18:50

　　<正>引言坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染是2010年在我国华东地区突然出现的一种新发传染病,可导致种鸭和蛋鸭产蛋大幅度下降,其发生和流行给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。E蛋白是TMUV的囊膜蛋白,可诱导中和抗体的产生并与之结合。本研究旨在制备针对E蛋白的单克隆抗体,为探究TMUV的免疫保护机制奠定基础。材料与方法

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【部分图文】：

图１重组蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析（Ａ）及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析（Ｂ）Ｆｉｇ．１ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（Ａ）ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ（Ｂ）ａｎａｌｙｓｅｓｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥｐｒｏｔｅｉｎ

能稳定分泌抗Ｅ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，它们分别被命名为１Ｆ３、１Ｇ２、１Ｂ１１、２Ａ５、３Ｂ６和４Ｆ９。２．２．１单克隆抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ结果（见图２）显示，６株单克隆抗体均与原核表达的Ｅ蛋白发生反应，而与空载体表达菌不反应。２．２．２单克隆抗体的....

图２单克隆抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｂｙＤｏｔ－ＥＬＩＳＡ

蛋白以包涵体的形式表达，分子质量约为６０ｋｕ（见图１Ａ）。Ｗｅｓ－ｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ结果显示，表达的重组Ｅ蛋白能够与鸭坦布苏病毒阳性血清发生特异性反应（见图１Ｂ）。２．２单克隆抗体的免疫活性分析经间接ＥＬＩＳＡ方法筛选及３次连续克隆化，共获得６株能稳定分泌抗Ｅ蛋白单克隆抗体的杂交....

图３单克隆抗体的Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析Ｆｉｇ．３ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｂｙＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ

Ｂ）。２．２单克隆抗体的免疫活性分析经间接ＥＬＩＳＡ方法筛选及３次连续克隆化，共获得６株能稳定分泌抗Ｅ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，它们分别被命名为１Ｆ３、１Ｇ２、１Ｂ１１、２Ａ５、３Ｂ６和４Ｆ９。２．２．１单克隆抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ结果（见图２）显示，６....

图４单克隆抗体的ＩＦＡ鉴定

２．２．３单克隆抗体的ＩＦＡ鉴定ＩＦＡ结果显示，６株单克隆抗体均与鸭坦布苏病毒感染的细胞呈阳性反应并产生绿色荧光信号，且荧光信号位于细胞质中；对照组无绿色荧光信号（见图４）。图４单克隆抗体的ＩＦＡ鉴定Ｆｉｇ．４Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏ....

本文编号：3934815