水牛卵母细胞GV/MⅡ期对应卵丘细胞miRNA差异表达分析

发布时间：2024-03-26 02:03

　　本研究旨在建立水牛卵母细胞体外成熟培养前后GV/MⅡ(Germinal vesicle,GV)/(MetaphaseⅡ,MⅡ)期对应的卵丘细胞miRNA数据库,筛选两个时期差异表达的miRNAs,为进一步阐明miRNA通过调控卵丘细胞中基因表达进而在卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用提供科学依据。分别收集水牛GV/MⅡ期的卵丘细胞,提取总RNA,利用Solexa测序技术获取小RNA测序数据,并进行生物信息学分析。结果表明:本研究成功构建了GV/MⅡ期卵丘细胞miRNA的表达谱,发现相对于GV期卵丘细胞,miRNA在MⅡ期卵丘细胞中表达差异显著上调的有24个,表达差异显著下调的有45个。采用qRT-PCR技术对随机筛选的8个miRNAs进行验证,证实其表达水平和RNA-seq分析结果相一致。结合靶基因预测和KEGG富集分析,获得了276条显著富集的信号通路;同时对富集前20的信号通路进行归纳总结,推测差异表达的miRNAs主要是通过细胞增殖、凋亡,物质代谢,细胞连接等途径在卵丘细胞中发挥作用。

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

图１ＧＶ（Ａ）和ＭⅡ（Ｂ）期的卵丘－卵母细胞复合体Ｆｉｇ．１Ｔｈｅｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅｃｏｍｐｌｅｘｓｏｆＧＶ（Ａ）ａｎｄＭⅡ（Ｂ）ｓｔａｇｅ

畜牧兽医学报４８卷１Ｂ）对应的ＣＣｓ为ＭⅡ期ＣＣｓ。其中ＧＶ期ＣＣｓ共收集６次，来自７０１个ＧＶ期卵母细胞的ＣＣｓ，ＭⅡ期ＣＣｓ共收集６次，来自６２０个ＭⅡ期卵母细胞的ＣＣｓ，将收集的两个时期的ＣＣｓ经１２００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，弃上清，再用ＰＢＳ重悬离心２次，弃上清，立....

图２小ＲＮＡ长度分布Ｆｉｇ．２ＬｅｎｇｔｈｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ

ＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣｂｔａ－ｍｉＲ－４９１－ＦＧＧＧＡＡＣＣＣＴＴＣＣＡＴＧＡＧｂｔａ－ｍｉＲ－１２９６－ＦＧＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＴＣｎｏｖｅｌ－２１４－ＦＣＴＣＧＣＣＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＣ统一反向引物ＵｎｉｆｉｅｄｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒＣＧＣＡＧＧＧＴＣＣＧＡＧ....

图６差异表达ｍｉＲＮＡｓ靶基因ＫＥＧＧ富集散点图Ｆｉｇ．６ＫＥＧＧｅｎｒｉｃｈｅｄｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔｆｏｒｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｏｆｍｉＲＮＡｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ

），其次是蛋白结合功能上（６７．３５％），再次是催化活性方面（３３％）和离子结合功能上（２４．４９％）。２．６差异ｍｉＲＮＡｓ靶基因ＫＥＧＧ富集分析在生物体内，不同基因相互协调行使其生物学功能，通过Ｐａｔｈｗａｙ显著性富集能确定候选靶基因参与的最主要生化代谢途径和信号转导途径。Ｋ....

图１ＧＶ（Ａ）和ＭⅡ（Ｂ）期的卵丘－卵母细胞复合体Ｆｉｇ．１Ｔｈｅｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅｃｏｍｐｌｅｘｓｏｆＧＶ（Ａ）ａｎｄＭⅡ（Ｂ）ｓｔａｇｅ

畜牧兽医学报４８卷１Ｂ）对应的ＣＣｓ为ＭⅡ期ＣＣｓ。其中ＧＶ期ＣＣｓ共收集６次，来自７０１个ＧＶ期卵母细胞的ＣＣｓ，ＭⅡ期ＣＣｓ共收集６次，来自６２０个ＭⅡ期卵母细胞的ＣＣｓ，将收集的两个时期的ＣＣｓ经１２００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，弃上清，再用ＰＢＳ重悬离心２次，弃上清，立....

本文编号：3939200