牛乳腺上皮细胞转运蛋白的亚细胞定位及油酸转运研究

发布时间：2024-03-30 00:45

　　本研究以植物来源长链脂肪酸为研究对象,研究蛋白介导转运方式在长链脂肪酸跨牛乳腺上皮细胞转运的作用。本研究首先利用RT-PCR技术对乳腺脂肪酸转运蛋白CD36编码区进行克隆和序列分析；通过组织块培养和胶原酶II培养法分离奶牛乳腺上皮细胞,采用机械刮除法纯化上皮细胞,并以荧光免疫技术鉴定角蛋白18和RT-PCR法鉴定酪蛋白,对上皮细胞进行了鉴定；以获得的乳腺上皮细胞为模型,通过构建GFP融合质粒技术,研究相关脂肪酸转运蛋白在乳腺上皮细胞的亚细胞定位；用C14标记油酸和亚油酸,通过检测细胞吸收的放射性,研究乳腺上皮细胞对油酸吸收的饱和性及转运抑制剂对上皮细胞转运油酸和亚油酸的影响。结果表明： 1.CD36基因cDNA的开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)长1419bp,编码472个氨基酸,编码蛋白相对分子质量为52.940KD,理论等电点为8.36。对其氨基酸序列进行同源性分析发现,中国荷斯坦奶牛与已知的哺乳动物CD36氨基酸序列同源性在82%-91%之间,系统进化树分析表明,中国荷斯坦奶牛乳腺CD36与猪CD36的亲缘关系最近。 2.组织块培养法和胶原酶消化法两种细...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-4CD36蛋白氨基酸序列的顿酸化位点预测

湖南农业大学硕士学位论文利用Protparam软件分析可知CD36基因编码的蛋白相对分子质量为52.940KD；分子式为C2422H3769N6()90682Si9;理论等电点为8.36;减性氣基酸总数(Arg+Lys)为49个，酸性氨基酸总数(Asp+Glu)为45个；亮氨酸(....

图3-2胶原酶II培养法细胞形态变化

第三章奶牛乳腺上皮细胞原代培养及鉴定至18天左右，成纤维细胞基本刮除，上皮细胞大量增值（图3-2-d)，长满培养皿60%左右密度，即可消化传代和保种。HHH^Ihh^^Ha.胶原酶消化1天（X100)b.胶原酶消化5天成纤维细胞（X100)C.上皮细胞纯化13天（X100)d....

图4-1pEGFP-C3质粒Fig4-1pEGFP-C3plasmid

图4-1pEGFP-C3质粒Fig4-1pEGFP-C3plasmid主要仪器同第二章2.1.3

图4-2CD36目的片段PCR产物凝胶电泳Fig4-2ThegelelectrophoresisofCD36genePCRproduct

mMTris-cl(pH8.5))。染乳腺上皮细胞培养皿中细胞密度达到80-90%，接24孔板，孔底铺爬片，每孔接种细胞xl05个，培养箱培养24h，细胞贴壁，按Lipofectamine2000Reagent转盒说明书操作，准备4管PCR管，分别加入2^iL，3^L,....

本文编号：3941553