腺病毒介导SpCas9对鸡AMH基因高效敲除系统的构建

发布时间：2024-04-01 00:56

　　抗缪勒氏管激素(Anti-Müllerian Hormone;AMH)又称缪勒氏管抑制物,是胚胎发育阶段控制性腺分化的重要激素之一。主要负责雄性动物早期胚胎输卵管性腺前体的退化,以及雌性家禽早期胚胎右侧输卵管的退化。但是AMH在胚胎发育早期阶段对性腺分化和输卵管前体退化的分子学机制依然尚未明确。近年来基因组精确编辑技术的突破性进展为AMH功能研究提供了良好的技术支持。尤其是CRISPR/Cas9的出现,使得内源性影响AMH的表达成为可能。作为RNA引导的、具有切割酶活性的核酸酶系统,CRISPR/Cas9的工作效率很大程度上依赖于sgRNA的靶向效率和外源核苷酸的转导效率。因此本次试验从提高sgRNA的靶向能力和SpCas9的转导效率两方面对靶向鸡AMH基因的CRISPR/Cas9敲除系统进行优化,从而提高CRISPR/Cas9对鸡AMH基因的编辑效率。1、为了提高sgRNA对鸡AMH基因的靶向效率,本试验构建了靶向鸡AMH基因第一外显子的成对sgRNA敲除载体pX330-U6-AMHsg1_dBsaI-CBh-SpCas9和pX330-U6-AMHsg2_...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1缪勒氏管退化的调控机制图解(Allardetal.,2000)

图1-1缪勒氏管退化的调控机制图解(Allardetal.,2000tionmechanismduringcranialMüllerianductregression(A性腺发育中的作用H的功能与哺乳动物类似，在胚胎发育时期会引ehringeretal....

图2-1鸡AMH基因靶位点的选择Fig.2-1SelectionofCas9targetsiteonChickenAMHgene

pCAG-FGCAACGTGCTGGTTATTGTGAMH-TA-FGTGTGCCGCCTGAAGATGGAAMH-TA-RAATGCTGCTGCTCCAGAACCAA2.2试验方法2.2.1鸡AMH基因敲除表达载体构建通过美国国立生物技术信息中心网站（https:....

图2-2鸡AMH敲除表达载体的构建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene用引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）进行Annealing获得20bp靶向鸡基因组

图2-2鸡AMH敲除表达载体的构建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene用引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）进行Annealing获得20bp靶向鸡基因MH-target1....

图2-3合成sgRNA的退火拟合程序Fig.2-3ProcedureforsgRNAannealing

图2-2鸡AMH敲除表达载体的构建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）进行Annealing获得20bp靶向鸡target1位置的s....

本文编号：3944760