表达禽β-防御素6重组乳酸菌的构建及其免疫调节活性检测

发布时间：2024-04-12 06:03

　　为构建表达禽β-防御素6(AvBD6)的重组乳酸菌并检测重组蛋白AvBD6(rAvBD6)的免疫调节活性,本研究根据GenBank AvBD6的参考序列,经过密码子优化后合成了AvBD6:AvBD6(G₄S)₃:AvBD6(G₄S)₃ AvBD6(G₄S)₃ AvBD6(4×AvBD6)串联基因序列,构建了表达rAvBD6的食品级乳酸菌表达菌株。经western blot检测显示,目的蛋白呈可溶性表达于乳酸菌细胞质中。以重组乳酸菌裂解上清为重组蛋白,与鸡外周血单个核细胞进行体外相互作用试验,荧光定量PCR结果显示,经r Av BD6刺激鸡外周血单个核细胞能够显著提高IL-10(p<0.0001)、IL-12p70(p<0.05)转录水平;重组蛋白与鸡巨噬细胞体外相互作用试验的荧光定量PCR结果显示,经rAvBD6处理的鸡巨噬细胞也能够提高IL-10、IL-12p70的转录水平(p<0.05);重组蛋白刺激干扰素调节因子IRF信号激活报告细...

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【部分图文】：

图1重组乳酸菌的PCR鉴定结果

以构建的重组乳酸菌pPG612-AvBD6HA/NZ3900细菌培养液为模板，利用引物tAvBD6-F/R进行PCR鉴定，结果显示，扩增片段大小与预期相符，阴性对照无目的条带（图1），经测序鉴定序列正确。表明，正确构建了重组质粒pPG612-AvBD6HA和重组乳酸菌....

图2rAvBD6融合蛋白表达的westernblot鉴定结果

重组乳酸菌pPG612-AvBD6HA/NZ3900经Nisin诱导后，westernblot鉴定结果显示，rAvBD6大小约为21ku，与预期相符，阴性对照无条带（图2）。BSA法定量结果显示，rAvBD6含量为33μg/mL。表明AvBD6在重组乳酸菌p....

图4rAvBD6刺激HD11细胞后细胞因子mRNA转录水平检测结果

rAvBD6刺激鸡巨噬细胞24h，采用荧光定量PCR对细胞中IL-10和IL-12p70的mRNA的转录水平定量分析结果显示，rAvBD6可以刺激鸡巨噬细胞产生较高水平IL-10(mRNA转录水平为6.62）、IL-12p70(mRNA转录水平为2.28），并且与....

图3rAvBD6刺激PBMCs后细胞因子mRNA转录水平的检测结果

利用rAvBD6刺激鸡外周血单个核细胞24h，采用SYBYGreenⅠ荧光定量PCR对细胞中IL-10和IL-12p70的mRNA的转录水平进行定量分析。结果显示：rAvBD6刺激外周血单个核细胞24h后，与阳性对照组和阴性对照组相比产生了高水平的IL-10[m....

本文编号：3951776