猪红细胞递呈免疫复合物分子机制的研究

发布时间：2024-04-14 20:20

　　目的：本论文旨在研究猪红细胞递呈免疫复合物的功能,以期为课题组进一步开展动物红细胞免疫系统及其分子机制的相关研究提供理论数据。方法：以长白猪为研究对象,常规分离猪肺泡巨噬细胞(PAM)及红细胞,以荧光大肠杆菌(FITC-WT E.coli)为报告因子,构建红细胞清除免疫复合物体外模型；运用激光共聚焦显微镜和流式细胞技术观察并分析猪红细胞对荧光杆菌的免疫粘附及荧光杆菌转移至巨噬细胞的免疫递呈过程；利用流式细胞技术分析猪CR1-like在红细胞递呈免疫复合物过程中的分子机制。结果：分离所得PAM经复苏培养,于倒置显微镜下观察可见细胞多呈圆形,形态大小均一,活力较好,呈半贴壁状态。加入台盼蓝染色液,镜检计数得细胞存活率为97.2%；PAM复苏培养体系中加入墨汁进行培养,于倒置显微镜下镜检可见细胞内细胞内有吞噬颗粒,计算得PAM吞噬率为98.8%；WT E.coli经FITC染色标记后,于正置显微镜下观察可见,菌体呈短棒状,大小为1-2gm；荧光场下,WT E.coli表现较强的绿色荧光,菌体荧光标记率为92.3%；激光共聚焦显微镜观察猪红细胞、PAM、荧光大肠杆菌共孵育体系可见2h5min、...

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＰＡＭ复苏培养及其吞隨活性镜检结果??

一，活为较好，呈半贴壁状态。加入台盼蓝染色液，镜检计数得细胞存活率为９７．２％?（如??图１Ａ所示）。??ＰＡＭ复苏培养体系中加入墨汁进行培养，于倒置显微镜下镜检可见细胞内细胞内??有吞嗤颗粒，计算得ＰＡＭ吞隨率为９８．８％?（如图１Ｂ所示），可用于后续试验。??隣拓．．．扣每遂....

图２?ＷＴ?￡．ｃｏＵ的Ｆ打Ｃ标记结果??＇

ＷＴＥｃｏ／ｚ？经Ｆ打Ｃ染色标记后，于正置显微镜下观察可见，菌体呈短棒状，大小为??１－２叫１１；巧光场下，ＷＴ表现较强的绿色巧光，表明菌体标记成功，且计算得菌体??巧光标记率为９２．３％?（如图２所示）；菌体Ｗ?ＰＢＳ缓冲液重悬移至激光共聚焦显微镜下??进行浑灭时间检测，可见，....

图３?ＰＡＭ竞争性结合黄光大腸杆菌观察结果??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＡＭ?ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

３．１激光共聚焦显微镜观察ＰＡＭ竞争性结合焚光大厥杆菌??经新鲜兔血清致敏的ＦＩＴＣ－ＷＴＥ．ＣＯ＆？先与红细胞解育，再与肺泡巨嗤细胞共赂育，??转入活细胞工作站，Ｗ激光共聚焦显微镜观察其转移过程（图３）。显微镜下观察可见，??巧光巧菌可分别粘附于猪红细胞表面或ＰＡＭ表面，观察时....

图４?ＰＡＭ竞争性结合巧光大肠杆菌流式细胞术检测结果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＡＭ?ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

３．２流式细胞术检测ＰＡＭ竞争性结合焚光大肠杆菌??上述共赠育体系中将猪红细化裂解，制备样本，经流式细胞仪检测ＰＡＭ的平均萊??光强度。检测结果显示，共艇育体组ＰＡＭ平均巧光强为６３２．０４?＋?４４．８２?（如图４Ｃ所示），??对照组ＰＡＭ的巧光强度值均值为５．３３?＋化０８?....

本文编号：3955169