抗猪轮状病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的初步建立
发布时间：2024-04-25 22:37
猪轮状病毒(Porcine rotavirus, PRV)隶属于呼肠孤病毒科,轮状病毒属,是引起仔猪病毒性腹泻的重要病原之一。该病主要感染幼畜,1日龄-10日龄仔猪感染后发病率可超过80%,死亡率高达50%-100%。主要症状为严重腹泻,部分病例因严重脱水、酸碱平衡失调并且继发感染而死亡,尤其是与猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻并发感染时,死亡率极高。该病在世界范围内分布广泛,给世界各地的畜牧业造成了严重的损失。 本研究以纯化的PRV病毒为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行细胞融合。通过间接ELISA方法筛选,采用有限稀释法对杂交瘤细胞进行筛选,通过3次亚克隆,获得了两株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2B3和1C11,经抗体亚类鉴定二者均为IgM亚类。2B3的杂交瘤染色体平均数为97,1C11的平均染色体数为102。间接ELISA测定细胞培养上清效价分别为：2B3的上清效价为1：103,1c11的上清效价为1:102。Western-blot及间接免疫荧光鉴定结果显示这两株单抗均能特异性的识别PR...
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 PRV病原学特征
1.1.1 PRV的形态结构和理化性质
1.1.2 轮状病毒的培养特性
1.1.3 轮状病毒的抗原分型
1.1.4 轮状病毒的基因组结构、蛋白及功能
1.2 轮状病毒的诊断方法
1.2.1 猪轮状病毒临床诊断
1.2.2 猪轮状病毒实验室诊断
1.3 单克隆抗体的研究进展
1.3.1 单克隆抗体的概述
1.3.2 抗PRV单克隆抗体的研究进展
1.4 研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 细胞与病毒
2.1.2 实验动物
2.1.3 临床粪便样品
2.1.4 培养基和主要试剂
2.1.5 主要试剂的配制
2.1.6 主要实验仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 免疫原的制备
2.2.2 免疫动物
2.2.3 杂交瘤筛选方法的建立
2.2.4 杂交瘤细胞株的建立与筛选
2.2.5 单克隆抗体效价的测定
2.2.6 单克隆抗体生物学特性鉴定
2.2.7 双抗体夹心ELISA方法的初步建立
2.2.8 双抗体夹心ELISA方法优化
2.2.9 双抗体夹心ELISA方法的灵敏性试验
2.2.10 双抗体夹心ELISA方法的特异性试验
2.2.11 双抗体夹心ELISA方法的重复性试验
2.2.12 双抗体夹心ELISA方法检测临床样品
3 结果
3.1 PRV的增殖及鉴定
3.1.1 PRV的增殖
3.1.2 PRV JL94株TCID50的测定
3.1.3 PRV病毒的纯化
3.2 杂交瘤细胞株筛选方法的建立
3.3 杂交瘤细胞株建立和筛选
3.4 单克隆抗体效价的测定
3.5 单克隆抗体生物学特性鉴定
3.5.1 单克隆抗体亚类鉴定
3.5.2 杂交瘤细胞染色体计数
3.5.3 杂交瘤细胞分泌单克隆抗体稳定性的鉴定结果
3.5.4 单克隆抗体针对的抗原表位鉴定结果
3.5.5 间接免疫荧光试验结果
3.5.6 单克隆抗体的特异性分析
3.6 双抗体夹心ELISA方法的初步建立及应用
3.6.1 兔抗PRV抗血清纯度鉴定及其浓度测定
3.6.2 兔抗PRV抗血清与McAb上清最佳工作浓度的确定
3.6.3 双抗体夹心ELISA方法优化
3.6.4 双抗体夹心ELISA方法灵敏性试验
3.6.5 双抗体夹心ELISA方法特异性试验
3.6.6 双抗体夹心ELISA方法重复性试验
3.6.7 临床样品处理液的选择
3.6.8 临床样品的检测
4 讨论
4.1 以病毒为抗原制备单克隆抗体的优势
4.2 抗PRV单克隆抗体用作检测试剂的特性分析
4.3 双抗体夹心ELISA法的建立
4.4 单克隆抗体制备过程中的几个重要环节
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3964335
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 PRV病原学特征
1.1.1 PRV的形态结构和理化性质
1.1.2 轮状病毒的培养特性
1.1.3 轮状病毒的抗原分型
1.1.4 轮状病毒的基因组结构、蛋白及功能
1.2 轮状病毒的诊断方法
1.2.1 猪轮状病毒临床诊断
1.2.2 猪轮状病毒实验室诊断
1.3 单克隆抗体的研究进展
1.3.1 单克隆抗体的概述
1.3.2 抗PRV单克隆抗体的研究进展
1.4 研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 细胞与病毒
2.1.2 实验动物
2.1.3 临床粪便样品
2.1.4 培养基和主要试剂
2.1.5 主要试剂的配制
2.1.6 主要实验仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 免疫原的制备
2.2.2 免疫动物
2.2.3 杂交瘤筛选方法的建立
2.2.4 杂交瘤细胞株的建立与筛选
2.2.5 单克隆抗体效价的测定
2.2.6 单克隆抗体生物学特性鉴定
2.2.7 双抗体夹心ELISA方法的初步建立
2.2.8 双抗体夹心ELISA方法优化
2.2.9 双抗体夹心ELISA方法的灵敏性试验
2.2.10 双抗体夹心ELISA方法的特异性试验
2.2.11 双抗体夹心ELISA方法的重复性试验
2.2.12 双抗体夹心ELISA方法检测临床样品
3 结果
3.1 PRV的增殖及鉴定
3.1.1 PRV的增殖
3.1.2 PRV JL94株TCID50的测定
3.1.3 PRV病毒的纯化
3.2 杂交瘤细胞株筛选方法的建立
3.3 杂交瘤细胞株建立和筛选
3.4 单克隆抗体效价的测定
3.5 单克隆抗体生物学特性鉴定
3.5.1 单克隆抗体亚类鉴定
3.5.2 杂交瘤细胞染色体计数
3.5.3 杂交瘤细胞分泌单克隆抗体稳定性的鉴定结果
3.5.4 单克隆抗体针对的抗原表位鉴定结果
3.5.5 间接免疫荧光试验结果
3.5.6 单克隆抗体的特异性分析
3.6 双抗体夹心ELISA方法的初步建立及应用
3.6.1 兔抗PRV抗血清纯度鉴定及其浓度测定
3.6.2 兔抗PRV抗血清与McAb上清最佳工作浓度的确定
3.6.3 双抗体夹心ELISA方法优化
3.6.4 双抗体夹心ELISA方法灵敏性试验
3.6.5 双抗体夹心ELISA方法特异性试验
3.6.6 双抗体夹心ELISA方法重复性试验
3.6.7 临床样品处理液的选择
3.6.8 临床样品的检测
4 讨论
4.1 以病毒为抗原制备单克隆抗体的优势
4.2 抗PRV单克隆抗体用作检测试剂的特性分析
4.3 双抗体夹心ELISA法的建立
4.4 单克隆抗体制备过程中的几个重要环节
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3964335
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3964335.html
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