一株乳源蜡样芽孢杆菌肠毒素基因克隆与序列分析

发布时间：2024-05-08 18:51

　　为研究患有耐药性奶牛乳房炎的致病菌毒力基因,本研究对从乳房炎患牛乳中分离鉴定的一株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)2018CQ-CMM01株肠毒素基因(Enterotoxin,Ent)进行了克隆与序列分析。采用PCR方法扩增临床分离株Ent基因片段,结果表明克隆基因全长1 098bp,可编码349个氨基酸;经氨基酸序列分析,发现该蛋白质为碱性的疏水性蛋白,稳定性弱,无信号肽结构,有5个跨膜区域;二级结构预测发现,延伸链为该蛋白的主要二级结构元素。核苷酸序列的同源性分析表明,与其他几株肠毒素菌株相比,本研究中克隆的Ent基因(GeneBank登录号:MT814304)与B. cereus克隆Pnc9肠毒素FM样基因部分序列(EF453659.1)相似度最高,为96.45%;Ent基因系统进化树分析发现,本研究中Ent基因与中国菌株CP040336.1的同源性最高,与巴基斯坦B. cereus标准株CP026375.1,泰国株EF453659.1、EF453660.1等处于不同进化分支,说明该Ent基因与中国菌株CP040336.1遗传距离最近;同时在Ent基因的ORF中存在...

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【部分图文】：

图1Ent基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳

通过对蜡样芽孢杆菌2018CQ-CMM01株的活化培养，提取基因组DNA，利用EntF和EntR引物进行PCR扩增，PCR扩增产物经过0.01g/mL的琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示，大约在1.100bp处有特异性条带，与预期结果一致（图1）。2.2Ent基因序列测定

图2Ent蛋白的疏水性分析

通过ProtParam程序分析得到，Ent蛋白理论分子质量（MW）为40.324.06，分子式为C1844H2763N435O507S37，原子总数为5.586；理论等电点(pl)为8.52，为碱性氨基酸；在氨基酸组成上，Ser(S)49个，占14.....

图3Ent蛋白二级结构预测

通过SOPMA平台预测发现，Ent蛋白二级结构的主要组成元素为延伸链，含141个，占40%，其次为无规则卷曲97个，占27.79%，α-螺旋95个，占27.22%，β-转角16个，占4.58%（图3），几种结构均无规律散在分布。2.3.3.Ent蛋白信号肽和跨膜区分析

图4Ent基因蛋白跨膜区

经SignalP数据分析，发现该蛋白在其N端27～28位有仅29.98%的可能存在信号肽；TargetP2.0分析结果表明该序列切割位点存在的可能极低，为16.91%，综合两种软件的分析结果，预测该Ent蛋白不存在信号肽或切割位点，是一种非分泌蛋白。利用TMHMM对Ent蛋白....

本文编号：3967676