β防御素124沉默通过p38MAPK/AP1通路调控山羊附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达

发布时间：2024-05-12 13:33

　　旨在研究山羊β防御素124(goat beta-defensin 124,gBD124)沉默对p38MAPK/AP1通路及下游细胞趋化因子和细胞因子表达的影响。本研究将设计的3条gBD124-shRNAs载入LV10-U6/RFP&Puro质粒载体,与包装质粒共转染到293T细胞中,用梯度稀释法测定病毒原液的滴度;将构建的3个LV10-gBD124和LV10-gBD124-NC载体转染到山羊附睾头细胞中,筛选有效沉默载体;然后用有效沉默载体联合转染附睾头细胞,设置了空白细胞对照组、LV10-NC组、有效沉默载体组,用2μg·mL^-1嘌呤霉素筛选后分别收集细胞和培养液,采用qRT-PCR、Western blot和ELISA检测gBD124、MAPK信号通路关键蛋白、细胞因子及趋化因子基因及蛋白表达情况。本研究构建了gBD124沉默慢病毒载体,筛选出LV10-gBD124-51和LV10-gBD124-161两个有效载体,并成功构建了gBD124沉默稳定转染的附睾头细胞株。与NC对照组相比,gBD124沉默显著降低了山羊附睾头细胞MAPK通路中MAPK1以及...

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【部分图文】：

图1LV10-gBD124沉默载体的shRNA序列测序结果

转染96h后在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白表达情况见图2。空白细胞对照组(图2A)和基因转染增强剂Polybrene组(图2B)无荧光;图2C和2D转染效果相比,转染液中添加基因转染增强剂5μg·mL-1Polybrene可提高慢病毒载体转染效果;从图2E～G转染效果看,L....

图6gBD124沉默对附睾头细胞p38、c-JUN和c-FOS蛋白表达的影响

图5gBD124沉默对附睾头细胞MAPK信号通路关键基因表达的影响2.3gBD124沉默对附睾头细胞趋化因子和细胞因子基因和蛋白表达的影响

图7gBD124沉默对附睾头细胞趋化因子和细胞因子mRNA表达的影响

哺乳动物附睾管壁的血-附睾屏障阻止血液中免疫球蛋白、免疫细胞、病原微生物以及精子抗原等进入附睾管腔内[1-5,25]。β防御素是一类小分子阳离子肽,通过免疫信号调节、免疫趋化等作用[26]发挥其抗菌活性[22,27]。有研究显示,人[12]、鼠[28]、绵羊[29]和山羊[11....

图2LV10-gBD124慢病毒转染附睾头细胞96h后荧光表达情况（100×）

图1LV10-gBD124沉默载体的shRNA序列测序结果图3LV10慢病毒转染后96h附睾头细胞gBD124相对表达量

本文编号：3971394